摘要 目的：从牙髓中酶学成分的变化探讨盖髓材料的效果。方法：用活体猫牙做直接盖髓，不同时期取材做酶的组织细胞化学研究。结果：不同材料对酶的影响不同，纤维粘连蛋白(Fibronectin, FN)与羟基磷灰石(Hydroxylapatite, HAP)复合材料对三种酶活性均有促进作用。结论：从酶学成分变化角度，FN加HAP复合盖髓材料是较理想的盖髓剂。
盖髓术是保存牙髓的重要方法。已有多种盖髓材料盖髓的实验研究和临床观察报道［1］，但一般限于组织病理学和疗效的观察。本研究目的是从牙髓中几种酶学成分变化角度，探讨盖髓材料的效果。
1 材料和方法
1.1 实验动物、主要材料和试剂
实验动物、材料和分组：参见薛明等研究［2］。
主要试剂：柠檬酸铅(Sigma，USA)，浓度5g/L；硝酸钴(沈阳试剂一厂)，浓度20g/L；β-甘油磷酸钠(德国Merck产品)，浓度30g/L；ATP-2Na盐(Sigma，USA)。
1.2 方法
盖髓操作方法同薛明等研究［2］。
牙髓中碱性磷酸酶(ALPase)和三磷酸腺苷酶(ATPase)的酶细胞化学检测参见Mayahara和Ogawa方法［3］。酸性磷酸酶(ACPase)的酶细胞化学检测参见钙钴法［4］。
2 结果
盖髓后1周，光镜下可见三种酶均呈阳性反应，不同盖髓材料间酶活性无明显差异(图1)。
盖髓后2周，氢氧化钙(CH)组ATPase和ACPase与1周时比较无明显变化，ALPase活性较1周时弱(图2)。纤维粘连蛋白(FN)组、羟基磷灰石(HAP)组、FN加CH组、FN加HAP组三种酶与1周时比较无明显变化。
图1 FN组，术后1周，ACPase阳性反应 ×400
图2 CH组，术后2周，ALPase活性比1周时弱×400
盖髓后5周，CH组的ALPase活性较2周时明显增高，ATPase和ACPase活性无明显改变(图3)。HAP组的ATPase活性比2周前增强，ALPase和ACPase活性无明显变化。FN组的ATPase和ACPase活性较强，ALPase活性无明显变化。FN+CH组的ATPase和ALPase活性较强，ACPase无明显变化。FN+HAP组的ATPase、ACPase和ALPase活性均有不同程度增高(图4)。
图3 CH组, 术后5周，ALPase活性比2周时增高×400
图4 FN+HAP组，术后5周，ATPase活性增高×400
3 讨论
盖髓术是保存活髓的重要方法，目前公认的盖髓材料是氢氧化钙制剂和羟基磷灰石。氢氧化钙盖髓剂主要是由于其高pH值使表层坏死同时促进ALPase的活性，进而促进修复性牙本质的形成［5］。羟基磷灰石具有良好的生物相容性，可为组织的修复提供支架，但本身并不能诱导成牙本质细胞的分化。学者们正致力于找到一种能综合不同盖髓材料优点的复合盖髓材料，并对其进行组织病理学研究和临床疗效观察［6］。
牙髓的酶细胞化学是牙髓生物学的重要组成部分，不同材料对牙髓的影响，均可从牙髓中酶学成分的变化反映出来，组织学上盖髓的成功应与组织中酶细胞化学的变化是一致的，我们的实验也说明了这一点。牙髓中有多种酶参与了牙本质的形成，ALPase、ACPase、ATPase是牙髓中最能体现细胞代谢活动的三种水解酶。ATPase在矿化开始时活性增加，可能与牙髓中Ca2+的运送有关［7］。ALPase可促进成牙本质细胞分化，进而影响组织的矿化。有研究表明，ACPase在成牙本质细胞开始产生牙本质时活性增强［8］。
FN是高分子糖蛋白，牙髓组织中富含这种物质，它参与了成牙本质细胞的分化，牙髓修复过程中有FN的表达，外源性FN做为盖髓材料可促进牙髓组织中硬组织的沉积［9～10］。不同的盖髓材料虽然在组织学上均表现为硬组织的形成，但对三种酶的影响是不同的。HAP盖髓5周后组织中ATPase活性增高，表明此时组织新陈代谢加快，修复能力增强；FN与CH复合制剂盖髓5周后ACPase无明显改变，可能是由于CH的高pH值抑制了该酶的活性。我们的实验表明：FN与HAP复合剂盖髓5周后三种酶活性均有不同程度增高，说明FN和HAP可起协同作用。从酶细胞化学角度，说明该复合制剂较理想，这与其它学者的组织学研究是一致的
