[摘要]目的：以骨钙素为细胞分化指标，探讨商用纯钛表面牙周韧带细胞形成物的特征。方法：将牙周韧
带细胞和纯钛进行复合培养，分别在第8天，第16天和第24天取材，免疫荧光染色原位观察骨钙素的表达。结
果：第8天后，牙周韧带细胞在纯钛表面即可形成复层生长，并持续高表达骨钙素。结论：牙周韧带细胞在纯
钛表面有向成骨样细胞分化的趋势，表现为形成高度表达骨钙素的类组织。
关键词：纯钛；牙周韧带细胞；骨钙素
【中国图书分类号】 R783 【文献标识码】a 【文章编号】1009-3761 〔2002〕 03-0140-03
随着口腔种植材料的发展，种植系统的不断完善，以及口腔修复技术的不断改进和提高；种植义齿
目前已成为临床上常用的修复方法。骨内种植体在颌骨内良好的固位，是种植义齿获得成功的关键。一般
认为，骨内种植体和骨组织之间存在3种支持固位的结合方式：骨性结合、纤维骨性结合及牙周结缔组织
附着。种植体周围新的牙周组织的形成，可以起到缓冲应力和生物封闭的作用，是一种更类似于天然牙的
结合方式。但是临床上还未能实现种植体周围牙周组织的再生。动物实验表明牙周韧带细胞(periodontal
ligament ceU，PDLC)是获得种植体周围牙周组织再生的前体细胞「1」。因此，探讨PDLC在种植材料表面
的生长、分化和细胞外基质的形成，将为临床上种体周围牙周组织的形成，提供理论依据。为了探讨纯
钛表面生长的PDLC的矿化组织形成能力，本文采用免疫荧光技术，就纯钛表面PDLC骨钙素(osteocalc-
in，OC)的表达进行了研究。
1．材料和方法
1．1材料
商用纯钛(宝鸡有色金属公司)；进口小牛血清(Gibco，USA)；高糖DMEM培养基(Glbco，USA)；
SABC-FITC试剂盒(武汉博士德公司)；荧光显微镜(Olympus)。
1．2方法
1．2．1钛片的制备：用精密车床将商业纯钛加工成直径9mm，厚lmm的钛片，用280#、320#、400#、
600#金相砂纸依次打磨。将打磨好的钛片依次放入蒸馏水，丙酮，70％乙醇，蒸馏水中，分别用超声波
清洗20、15、20分钟。紫外线消毒，备用。
1．2．2细胞培养：取临床上因正畸而拔除的无龋病和牙周病的牙齿。牙齿拔出后，用Hanks液冲洗3遍，
刮取牙根中1／3处的牙周膜，剪成lmm3大小的
组织块，均匀地铺于培养瓶底。轻轻翻转瓶底向上，加入0．5ml含100ml／L灭活小牛血清、100U／ml链霉
素和100U／ml青霉素的DMEM培养液，置于CO，孵箱(37~C恒温、100％湿度、95％空气、5％CO，)孵育
2小时，待组织块贴牢瓶底后，轻轻翻转培养瓶，继续培养「2」。每4天换液一次，直至细胞从组织块周围游
出、传代，取第4-6代细胞进行实验。
1．2．3细胞接种：将打磨消毒好的钛片放入12孔板中，传代细胞酶消化，以2．5 x 105／ml细胞密度接
种于钛片表面，隔日换液。每8天取7枚钛片，2％戊二醛固定，共观察24天。
1．2．4免疫荧光染色：取出固定好的钛片，进行OC的免疫荧光染色。OC(LF-32)一抗由Dr．Fisher
(NIH,NIDCR)提供，稀释度为1：2000。荧光显微镜下观察，相同条件下摄影。
2．结果
细胞接种后第8天，PDLC在商用纯钛表面逐渐融合生长，细胞生长方向与钛片打磨的方向—致，细胞形
态呈长梭形。第16天，PDLC数量持续增加，细胞的生长方向和细胞形态与第8天时相同。第24天，PDLC在纯
钛表面形成致密细胞层，细胞间隙不清，细胞走向开始变得模糊。在不同的时间段，纯钛表面生长的PDLC中
均明显表达OC。
3．讨论
牙周组织学研究表明，PDLC足构成牙周组织的主要细胞，也是牙周组织再生的功能性细胞。目前认
为PDLC足一种具有多种分化潜能的细胞，在不同的条件下，能够向成骨细胞、成牙骨质细胞和成纤维细
