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摘要 目的：了解超氧化物歧化酶(SOD)对变链菌Ingbritt、6715 生长和粘附的影响情况。方法：用麦氏比浊法分别比较不同浓度SOD对两种变链菌蔗糖琼脂培养基纯培养的细菌生长量；用液闪计数值比较SOD对两种变链菌体外在羟基磷灰石(HA)上的粘附量。结果：在SOD存在时，两种致龋菌的生长量大于没有SOD时的生长量；SOD作用于获得性膜和致龋菌的体外粘附过程时，两种致龋菌的粘附量显著降低，SOD作用于致龋菌生长过程，变链菌Ingbritt 的粘附量升高，变链菌6715的粘附量显著降低。结论：外源性SOD促进致龋菌的生长， 使致龋菌的粘附量发生改变。
变形链球菌(streptococcus mutans,简称变链菌)是口腔中主要致龋菌，是兼性厌氧菌，它的能量代谢依赖于糖酵解［1］，由于缺乏细胞色素和过氧化氢酶系统，变链菌不能进行有氧氧化作用， 但是由于超氧化物歧化酶(SOD)的存在［2］，变链菌能够在有氧条件下生长，并进行氧的代谢活动，Nakayama(1992)［3］报道：缺乏SOD的变链菌能够在有氧条件下生长，但生长速度比有SOD的变链菌慢。本研究通过外源性SOD的加入，观察变链菌的生长及在体外与羟基磷灰石(HA)的粘附情况。
1 材料和方法
变形链球菌Ingbritt、6715标准株(第四军医大学口腔医学院检验科保存)复苏、生化鉴定后，加入蔗糖琼脂培养基(第四军医大学西京医院检验科制备)，厌氧(37℃，800ml/L N2，100ml/L H2，100ml/L CO2)培养18h，PBS(pH=7.0)缓冲液离心洗涤3 次(4℃，10?000r/min，15min)后，采用麦氏比浊法，分别用PBS缓冲液稀释至1×1012CFU/L，每种细菌分装于7支灭菌的小试管内，每管 1ml，离心，弃去上清，分别按浓度梯度(单位g/L)0.1、0.05、0.025、0.0125、0加入PBS配制的SOD(活性单位：3×106U/g液，再在每管中加蔗糖琼脂培养基，使每支小试管中的液体总量达4ml，另两支试管分别加入 0.1g/L SOD液和等体积PBS 液， 再加入蔗糖琼脂培养基， 使其体积为4ml，按3.7×107Bg/L加入3H-TdR(中国科学院北京原子能研究所)，振荡混匀后， 置厌氧孵箱(37℃，800ml/L N2，100ml/L H2，100ml/L CO2)18h，离心，采用麦氏比浊法测每管细菌量。加3H-TdR的4支试管，采用麦氏比浊法，分别用PBS缓冲液稀释至1×1012CFU/L，按以下过程进行粘附实验，5mg HA(sino-American Biotechnotgy公司产品，华美生物工程公司分装)＋100μl全唾液(37℃，6r/mim 2h) → PBS 缓冲液洗两次→ 100μl,5g/L人血白蛋白PBS缓冲液(37℃，6r/min 30min)→PBS缓冲液洗两次， 阳性对照组加入未加SOD培养的3H-TdR标记的细菌100μl，阴性对照组加入0.1g/L 灭活的SOD液100μl和未加SOD培养的3H-TdR标记的细菌100μl，实验组又分成三组，第一组先加入0.1g/L SOD液100μl(37℃，6r/mim，2h)→PBS洗两次→100μl未加SOD培养的3H-TdR标记的细菌，第二组加入0.1g/L SOD液100μl和未加SOD培养的3H-TdR标记的细菌100μl；第三组加入培养时加SOD液的3H-TdR标记的细菌100μl， 以上五组在37℃，6r/min旋转1h，PBS洗三次，烤干，加入1ml闪烁液，液体闪烁计数得每分钟计数值。
2 结果 (表1、2)
表1 不同浓度(g/L)SOD对致龋菌生长的影响(CFU/ml) |