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许多学者已利用层析、凝胶电泳及氨基酸分析技术，发现无论在人或牛的牙釉质中，蛋白质的组成均以甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸、胱氨酸、天门冬氨酸的含量最高［1］。Linden (1985)［2］对牛牙釉质表层下脱矿中蛋白质的丧失情况进行了研究，发现蛋白质在脱矿过程中丢失。丢失的氨基酸主要为甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸，即以正常的牛牙釉质中所含的主要氨基酸为主。本文用氨基酸自动分析方法，对人釉质初期龋损组织中以及邻近的正常釉质中氨基酸组成含量进行分析，以探讨在人釉质初期龋形成过程中，釉质氨基酸的变化情况。
1 材料和方法
收集有白垩斑的新鲜离体磨牙，用超声清洁器清洁牙体24h后，刷洗牙面，再用离子交换蒸馏水漂洗30min，在体视显微镜下，用牙科涡轮机700号牙钻，切割收集的初期龋损组织(白垩斑)块，并在相邻的正常釉质区收集正常釉质块，分别置超声清洗器中用离子交换蒸馏水清洗1h，再于37℃烘箱中烘干，用玻璃研钵将其研成粉状，分别称取适量置塑料离心管中，加1ml离子交换水，浸渍24h，离心(15000r/min，10min)，取上清液备测，沉淀在37℃烘箱中烘干至衡重备测。
取10μl上清液置微量离心管中，准确吸取50μl磺基水杨酸，加入离心管与上清液充分混匀，再加入适量0.005mol/L HCl调节pH为5.0，充分震荡后静置10min(室温)，离心(5000r/min， 5min)，取上清液上机(氨基酸自动分析仪HITACH835-50)测游离氨基酸。
取适量干燥釉质粉置塑料离心管中，加入3mol/L HCl 8ml，混匀，抽去空气，充满氮气后密封试管中，在110℃下水解24h。取出试管剖开，过滤、蒸干，用0.005mol/L HCl定容，取液样上机测定氨基酸。
2 结果和讨论
初期龋与正常釉质组织粉末浸渍液中游离氨基酸的组成和含量均为0。初期釉质龋损组织与正常釉质组织粉末氨基酸组成与含量相比，初期龋损组织中氨基酸含量明显减少。初期釉质龋损组织与正常釉质组织中氨基酸组成与含量比较(表1)。
表1 初期釉质龋损与正常釉质组织氨基酸含量(ng)比较
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初期釉质龋 |
正常釉质 |
| 天门冬氨酸* |
0.404 |
0.527 |
| 苏氨酸** |
0.110 |
0.159 |
| 丝氨酸* |
0.133 |
0.266 |
| 谷氨酸* |
0.601 |
0.829 |
| 甘氨酸* |
1.549 |
2.792 |
| 丙氨酸* |
0.370 |
0.876 |
| 胱氨酸** |
0.172 |
0.132 |
| 缬氨酸* |
0.333 |
0.236 |
| 异亮氨酸** |
0.155 |
0.096 |
| 亮氨酸** |
0.255 |
0.315 |
| 苯丙氨酸** |
0.223 |
0.262 |
| 赖氨酸 ** |
0.224 |
0.252 |
| 组氨酸 |
0.066 |
0 |
| 精氨酸 |
0.276 |
0 |
| 脯氨酸 |
0 |
0.069 |
* P<0.05 ** P=0.05 n=10
在正常釉质中主要含有甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸，无精氨酸和组氨酸。
在初期釉质龋损组织中，主要含有甘氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸，无脯氨酸。
在初期釉质龋损组织中，谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸、脯氨酸与正常釉质中同名氨基酸相比，含量明显减少(P<0.05)；缬氨酸、组氨酸、精氨酸含量有所增加。
本组初期龋与正常釉质组织粉末浸渍上清液中游离氨基酸含量与组成为0。说明在制取初期釉质龋粉末中无氨基酸丢失。
在人牙釉质初期自然龋脱矿的同时，存在着蛋白质的分解，且主要以酸性可溶性蛋白质的分解为主。
责任编辑：姚红祥 |