粘放菌I型菌毛的提取和鉴定对于菌毛作用机理的研究具有重要的意义〔3，4〕，为此我们曾采用菌毛蛋白分子量的鉴定和透射电镜检查以及氨基酸组成分析以确定菌毛的纯度(另文报告)。为了进一步对提取的菌毛纯度进行鉴定，本实验采用了Western-Blotting对提取的菌毛作进一步的鉴定。结果显示，兔抗粘放菌I型菌毛的单克隆抗体能完全与粘放菌5519 I型菌毛相结合，出现清晰的条带，经与SDS-PAGE电泳相比较，其相对分子质量约为54 000和38 000，与我们先前的结果相一致，这不仅说明提取的菌毛蛋白纯度高，而且也说明制备提取的抗体纯度好、效价高。Maurer和John等也曾报道粘放菌I型菌毛具有两个不同组分，一组相对分子质量为54 000，可能为菌毛的主要蛋白成份，另一组为38 000，可能为I型菌毛的亚单位或者递解产物〔5〕。
3.2　上样样本量、印渍时间与印渍效率的关系
　　许多实验都证明，样本上样量，印渍时间与Western-Blotting方法的印渍效率有很大关系。就上样量而言，若蛋白质含量在10 μg以下则很难检出，若大于25 μg，则检测结果同样有很大差异〔6〕。为此，本实验在作预实验时也采用了二种不同含量的蛋白质进行样本上样。一组上样量为7.2 μg，另一组为16.5 μg，并进行对照，结果显示，16.5 μg印渍效果明显优于7.5 μg组。这再一次证明，要取得较好印渍效果，必须将样本上样量控制在一定的范围内，一般认为在10～25 μg内，才能取得较好的实验效果。此外，有人报道印渍的效果还取决于蛋白分子量与印渍时间的关系，如小分子蛋白Mr 30 000和Mr 45 000，只需30 min印渍时间即可达到最佳效果〔7，8〕。本实验中菌毛蛋白相对分子质量约在Mr 38 000～54 000间，我们结合以上经验，兼顾分子量，适当延长了印渍时间，同样取得了较好的印渍效果。
　　根据我们以往的实验结果，包括菌毛相对分子质量的测定、电镜检查、氨基酸组成以及此次Western-Blotting免疫印迹法检查，可以确定，从粘放菌5519中提取的I型菌毛具有二个蛋白相对分子质量，一为Mr 54 000，另一为Mr 38 000。今后应进一步研究这二个相对分子质量之间的关系以及在细菌粘附中的作用。

本课题为国家自然科学基金资助课题，项目编号 39670782
作者单位：上海第二医科大学口腔医学院　200011

参考文献

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责任编辑：姚红祥