注：Hp：幽门螺杆菌；U(+)：尿素酶C基因阳性；U+C(+）：尿素酶C基因及cag a基因均阳性；* 龈下菌斑显著高于龈上菌斑， p＜0.01

       讨论 口腔菌斑复杂、特殊的生态环境及Hp复杂的营养要求，使得从菌斑中培养分离Hp较为困难[6]。近年来高敏感、高特异性的PCR技术已成功地用于检测菌斑和唾液中的Hp［7］。然而许多研究即便运用PCR方法也未能从菌斑中检测出Hp［8］。这些研究结果的不同，原因之一是菌斑取样部位及方法的差异,许多研究对龈上菌斑和龈下菌斑不加区别，没有考虑牙位特异性，而不同取样方法（纸捻法、牙签法、刮匙法）获取的菌斑成分的质和量差异甚大。原因之二可能与采用的DNA提取方法及PCR引物设计不同有关。基于Hp的不同特异基因如尿素酶基因，16SrRNA，特异26 000蛋白的编码基因和随意选择的DNA片段的引物设计建立了多种PCR方法，从菌斑中获取和纯化Hp DNA的不同方法可以造成最终DNA模板质和量的差异，直接影响了PCR检测的结果[6]。本研究中，我们从每例患者口腔中取6个牙位的龈上、龈下菌斑共12份样本，多份样本的分别检测减少了假阴性率；以快速提取法获取菌斑样本中的DNA，损失量较小；本研究选用美国市售PCR试剂盒，扩增的两段目的基因(urease C 基因：294bp, cagA基因：400bp)，其特异性已由Bickley等[4]及Lage等［5］通过杂交和酶切得到证实；本实验有约3%的标本为两个基因片段均阳性，而阴性对照组所用的一些可能产生尿素酶的细菌却未能扩增出，综上分析，本组结果的可信性较高。另外从本研究的两组患者血清和龈沟液中检测出抗 Hp的IgG抗体（将在另文报道），也是有力佐证。本研究中胃病患者的牙菌斑中Hp检出率为28.8％(尿素酶C基因阳性)，与Mapstone等[7]报道用巢式PCR检测的结果（23.8%）相近。

　　以往对非胃病人群菌斑内Hp的研究仅有少量报道，Majmudar等[9]从健康人菌斑中培养分离出Hp(100％)，而Asikainen等[8]用PCR法检测336例牙周炎患者的1 000份菌斑，均未检出Hp。本研究从无主诉消化道症状的牙周炎患者的菌斑中也检出Hp(49.2%)。值得一提的是，来自不同研究结果的差异除上面分析的原因外，Hp感染还可能与种族、饮食、教育、经济状况等的差异有关[10]。

　　我们还首次初步分析了菌斑中Hp的存在与牙周袋的深度及炎症状况的关系。结果提示从受检者的多个存在炎症、中等深度的牙周袋处取样有可能提高Hp的检出率。我们的研究结果支持菌斑是Hp的另一个生存环境的假说。尽管如此，口腔内Hp究竟从何而来、在牙周病的发生和发展中起何作用及其与胃内Hp感染的关系等，尚需进一步研究。

　　参考文献

　　[1]　Warren JR, Marshall BI. Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis. Lancet, 1983, 1: 1273.

　　[2]　Tursi A, Cammarota G, Papa A, et al. The modes of transmission of Helicobacter pylori infection. Recent Prog Med，1997， 88: 232-236.

　　[3]　Krajden S, Fuksa M, Anderson J， et al. Examination of human stomach biopsies, saliva， and dental plaque for Campylobacter pylori. J Clin Microbiol, 1989, 27:1397.

　　[4]　Bickley J, Owen RJ, Fraser AG, et al. Evaluation of the polymerase chain reaction for detecting the urease C gene of Helicobacter pylori in gastric biopsy samples and dental plaque. J Med Microbiol, 1993, 39：338-344.

　　[5]　Lage AP, Godfroid E, Fauconnier A ，et al. Diagnosis of Helicobacter pylori infection by PCR: comparison with other invasive techniques and detection of cagA gene in gastric biopsy specimens. J Clin Microbiol, 1995, 33: 2752-2756.

责任编辑：韩晓炜