摘　要：目的：探索釉基质蛋白(Enamel Matrix Proteins,EMPs)应用的最佳剂量和甲壳质作为载体的可行性。方法：采用乙酸提取法获得猪釉基质蛋白，选用甲壳质作为载体膜，分别选择4种剂量的釉基质蛋白做猴牙周骨缺损的再生实验研究。结果：15mg剂量组可获得高达78.33%的牙骨质再生和75%的牙槽骨再生，明显高于5、10和20mg组。结论：15mg的EMPs为诱导牙周组织再生的最佳剂量，甲壳质可作为良好的载体材料。

　　国外一些实验研究结果表明，釉基质蛋白(Enamel Matrix Proteins EMPs)具有明显的诱导牙周组织再生的能力［1～3］，这些研究成果为提高牙周病临床治疗的疗效展示了新的途径。我们已通过乙酸提取法获得了猪EMPs，并采用SDS-PAGE凝胶电泳和氨基酸测序法确定了EMPs的性质，证实了其同属种类间的遗传保守性，为临床应用提供了理论依据［4］。但作为生长因子(Growth Factors，GFs)在促进组织或细胞生长过程中，不仅对细胞增殖、分化、趋化、形态学及基质合成等方面的影响能力是不同的，而且还具有剂量依赖性增生效应——量效效应。为了摸索我们所提取的猪EMPs诱导牙周组织再生生物活性的最佳使用剂量，我们进行了量效实验，为以后的EMPs诱导牙周组织再生的临床应用剂量提供可靠的理论依据。

1　材料和方法

1.1　实验动物
　　选择3～4岁成年猕猴1只，雄性，体重3.75kg。由上海市实验动物研究中心提供，经检疫确认无传染性疾病。
1.2　实验材料
　　取EMPs冻干粉，ddH2O彻底溶解。采用甲壳质膜材料(由中国纺织大学馈赠，降解时间40～50d)作为载体膜，裁剪为10mm×10mm大小,与EMPs复合，使每张膜分别含EMPs 5、10、15、20mg。
1.3　实验方法
1.3.1　手术过程
　　实验动物采用氯胺酮肌注加戊巴比妥钠(20～30mg/kg)静脉复合麻醉的方法。常规消毒、铺巾，清除术区和周围牙面菌斑、牙石。分别在上、下颌骨4个区翻开粘骨膜瓣，在第二前磨牙、第一磨牙颊面釉牙骨质界(CEJ)做切迹。用手机去除第二前磨牙、第一磨牙近中根颊侧的牙槽骨,刮除牙骨质，去骨高度为CEJ下6mm，并在根面做切迹，彻底刮净根面的牙周膜纤维。500g/L枸橼酸处理根面，生理盐水冲洗。于各手术区分别放置含5、10、15、20mg EMPs的甲壳质膜，顺时针方向依次编号为A、B、C、D区，龈瓣复位缝合。
1.3.2　标本制备
　　于术后8周处死动物，立即截取术区颌骨标本，中性甲醛溶液固定，脱钙液中脱钙，常规石蜡包埋，制备6nm切片,常规HE染色，中性树胶封片。
1.3.3　组织学观察测量
　　光镜下观察载体材料吸收情况、结缔组织内炎症情况、结合上皮根向移行情况。并测量如下指标：
　　牙骨质再生高度：计算占CEJ至根方切迹长度的百分率。
　　牙槽骨再生高度：计算占CEJ至根方切迹长度的百分率。

2　结果

2.1　大体观察
　　动物伤口愈合良好，牙龈无充血、水肿。术后8周，术区外观除牙龈稍有退缩外，无色、形、质的改变，与牙体附着紧密，未探及牙周袋。
2.2　组织学观察
　　所有实验术区甲壳质载体材料均已完全吸收，结缔组织内均未见明显炎症细胞浸润。各组诱导牙骨质和牙槽骨再生高度的百分率见图1。

图1　各组诱导牙骨质和牙槽骨再生高度的百分率

　　A区(5mg组)：牙龈轻度退缩，未见明显的结合上皮根向移行，牙骨质再生达51.67%，新生的牙骨质均为无细胞性牙骨质，牙槽骨再生为21.67%。
　　B区(10mg组)：牙龈轻度退缩，未见结合上皮明显根向移行，牙骨质再生明显，达71.67%，牙槽骨再生为26.67%。
　　C组(15mg组)：牙龈无明显退缩，未见明显的结合上皮根向移行，牙骨质再生达78.33％，且与根部的牙本质附着紧密，表面可见密集排列的成牙骨质细胞。牙周韧带排列有序，与新生的牙骨质穿通。牙槽骨再生达75%，新生的牙槽骨表面可见较多的成骨细胞(图2、3、4)。
　　D组(20mg组)：牙龈退缩，可见结合上皮根向移行，牙骨质和牙槽骨再生均不明显，分别为6.67%和3.33%。

责任编辑：姚红祥