【摘要】　目的　筛选出与疾病相关的蛋白质分子。方法　采用龈沟冲洗法获取龈沟液，用微量自动快速电泳仪分析了86例龈沟液样本(其中健康龈20例、龈炎24例、牙周炎42例)。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳分离的蛋白质区带用快速图象分析仪进行测量。结果　在炎症情况下分子量为82 000、77 000及17 000的血清源蛋白质发生率较健康龈升高，分子量为41 000 、21 000、12 000的非血清源蛋白质发生率亦较健康龈高，丰度值大。结论　分子量为82 000、41 000、21 000及12 000的蛋白质可能与牙周炎有较密切的关系。
　　【关键词】　龈沟液　　蛋白质类　　电泳

　　蛋白质是龈沟液中的重要成分，它来源于血浆、宿主细胞的产物、组织破坏降解产物、菌斑及其产物。龈沟液的量和主要成分会随破坏性病变的发生而变化，蛋白质总量和成分也会发生变化，然而有关这方面的研究极少。鉴于十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gelelectrophoresis, SDS-PAGE)能用于分析蛋白质亚基并测定其分子量，我们用SDS-PAGE法检测牙周健康者和牙周病患者龈沟液的蛋白质，分析并比较蛋白质成分的变化与取样部位临床表现的变化。由于龈沟液量少蛋白质含量低，我们采用微量快速自动电泳仪进行蛋白质检测。

对象和方法

　　1.研究对象：成人牙周炎(adult periodontitis,AP)患者11例，年龄22～49岁。牙周组织均破坏较重，牙周袋深度>5 mm，牙周附着丧失>6 mm，X线片显示牙槽骨有不同程度水平型或角型吸收。将X线片显示牙齿近远中牙槽嵴顶骨硬板消失或边缘模糊、骨密度降低者记为“进行性骨吸收”，反之为“静止性骨吸收”。龈炎(gingivitis, G)患者6例，年龄18～31岁。牙龈炎症明显，无附着丧失，无牙周袋。5例牙周健康者(health, H)，年龄22～26岁。
　　2.龈沟液的采集：记录上述患者和健康者取样牙位的菌斑指数，用洁治器去除龈上菌斑，棉卷隔湿，气枪轻轻吹干牙面，用30 μl Tris-HCl液分3次冲洗取样牙的颊侧近中或远中龈沟(袋)，将3次回吸的龈沟液置于同一离心管中，人均约取4个样本(H组20个，G组24个，AP组42个)，带血样本遗弃。取样后记录取样牙位的出血指数、牙周袋探诊深度及附着丧失情况。抽取受检者静脉血，获取血清。龈沟液和血清样本均置于-70℃保存待用。各龈沟(袋)冲洗回吸液量不等，健康龈和牙龈炎组的回吸液量为15～25 μl，牙周炎组的回吸液量为20～30 μl, 明显高于龈炎和健康龈组。
　　3.电泳及染色：取5 μl龈沟回吸液测定蛋白含量，并测出剩余回吸液量，计算所含蛋白质总量。然后将剩余回吸液置于100℃烤箱中加热5 min，37℃干燥。干燥的龈沟液样本用2% SDS样本缓冲液(含5%巯基乙醇)溶解，使样本蛋白质的最终浓度为2～4 g/L。血清样本用2% SDS样本缓冲液1∶20稀释。电泳所用丙烯酰胺/双丙烯酰胺均质胶的浓度为12%，胶厚度为0.5 mm。将同一受检者不同牙位的龈沟液样本及血清样本加样在同一块胶上，并设中分子量和低分子量蛋白标准。电泳条件参照Phast SystemTM设置［1］，电泳时间为60 vh。均质胶银染色方法参考周爱民、杨开宇的染色方法［2］。
　　4.凝胶分析：银染色凝胶用Phast Image 仪(Pharmacia LKB, Sweden)进行扫描，根据标准蛋白质的迁移率来测定各样本区带蛋白质亚基的分子量，并进行各带的定量分析。

结果

　　牙周健康、龈炎、牙周炎部位的龈沟液样本银染色的蛋白质区带数(±s)不同，H组为6.05±2.11，G组为8.83±3.30，AP组为7.83±2.21。AP组和G组的蛋白质区带数显著高于H组(P<0.005)。比较龈沟液和血清蛋白质的电泳谱图，龈沟液中分子量为82 000，77 000， 66 000，51 000， 26 000， 17 000的蛋白质与血清一致，而分子量为41 000，31 000，21 000，12 000，10 000的蛋白质为非血清来源的蛋白质。分子量17 000，21 000，31 000，38 000，41 000，77 000的蛋白质在炎症组的发生率显著高于健康组。在龈炎及健康组中检测率较高的10 000蛋白质在牙周炎组发生率低(H 60.0%，G 83.3%、AP 20.0%)，见附图。

责任编辑：姚红祥