摘要　目的：探讨白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF α)对牙周组织的作用。方法：将IL-1β、TNF α注入到兔的牙周组织，以生理盐水为对照，不同时期取材做组织学观察和评价。结果：实验组15天后牙龈组织血管扩张充血，牙槽骨改建活跃，有大量的骨吸收陷窝及破骨细胞，并有新骨形成和破骨细胞出现；30天后仅表现为大量的骨陷窝及破骨细胞，无成骨现象，且以联合应用IL-1β、TNF α组最显著。结论：IL-1β、TNF α均能引起牙龈炎症反应、附着上皮和牙槽骨的破坏，提示IL-1β、TNF α在牙周组织疾病中有作用。
　　关键词　白细胞介素1β　肿瘤坏死因子α　牙周组织
　
　　破骨细胞活化因子(osteoclast activating factor, OAF)是引起牙槽骨破坏的重要因素，其中白细胞介素1(interleukin-1, IL-1)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)是主要因子［1］，它们不仅有破骨作用，而且有成骨作用。本实验将IL-1β和TNFα直接注入兔的牙周组织后，观察其组织病理学变化，目的是通过动物实验探讨IL-1β和TNFα对牙周组织的作用，探讨其发病机理，并期望能指导临床预防和治疗牙周病。

材料与方法
　　1. 材料：将24只健康大耳白兔随机分为4组，每组6只，生理盐水对照组(A)， IL-1β组(B)， TNF α(组)(C)，IL-1β和TNF α联合组(D)。IL-1βα和TNF α购自中国军事医学科学院生物制剂研究中心。
　　2. 方法：麻醉动物，消毒，在双侧上、下磨牙颊侧龈缘下3mm附着龈处注射给药，对照组给予生理盐水。各组给药3次后，第15天各组均处死3只，其余的再给药3次，第30天全部处死。给药间隔时间和每次给药剂量(见表1)。

表1　给药间隔时间和每次剂量

组别	兔(只)	给药间隔(天)	每次给药剂量
A	6	4	0.5ml(生理盐水)
B	6	4	1 000u/0.1ml
C	6	4	50 000u/0.5ml
D	6	4	1 000u/0.1ml(IL-1β)
			50 000u/0.5ml(TNF α)

 

3. 标本处理及组织学染色：处死动物，取兔注射部位的牙齿及牙周组织，肉眼观察并照相，标本冲洗后置于10%福尔马林液中固定48h，组织修复后置入乙二氨四乙酸(ethylendiaminotetraaceticacid, EDTA)脱钙液中，常规脱水，浸蜡，包埋，制备6～8μm颊舌向纵切片，HE染色，组织学观察并照相。

结　果
　　1. 肉眼观察：A组牙龈组织呈粉红色，无充血水肿，无炎症性改变。B、C、D组分别在用药10d，15d，7d牙龈组织轻度充血。
　　2. 组织学观察：A组血管无扩张充血，牙槽骨及牙骨质无破坏，牙周膜纤维排列规则。B、C、D组用药15d均可见血管明显扩张充血，牙槽骨改建活跃，在牙槽嵴顶及固有牙槽骨可见大量骨吸收陷窝和多核破骨细胞，在骨吸收基础上可见骨嗜硷性线增强，新骨形成和成排的成骨细胞，骨新生后再吸收。C、D组牙周膜间隙扩大，成纤维细胞丰富，B、C、D组用药30d，在牙槽嵴顶及固有牙槽骨只见明显的骨吸收陷窝及多核破骨细胞，而无新生骨及成骨细胞。D组与B、C组比较可见附着上皮破坏，牙骨质表面出现明显吸收，牙周膜主纤维排列紊乱，极性丧失，个别区域纤维束中断。(图1～4)

图1　B、C、D组15d，血管扩张充血，牙槽骨改建活跃(HE×20)

图2　B、C、D组30d，只见骨吸收陷窝及破骨细胞(HE×20)

图3　D组30d，牙骨质表面吸收(HE×20)

图4　D组30d，牙周膜主纤维束排列紊乱(HE×20)

讨　论
　　1. IL-1β对牙周组织的作用
　　牙周组织中的上皮细胞、单核吞噬细胞能分泌IL-1，因此学者们推测IL-1在牙周组织的免疫应答、炎症反应及牙槽骨吸收中起到一定的作用。Charon等人［2］应用胸腺增殖试验检测龈沟液中的IL-1，发现炎症区IL-1浓度明显高于非炎症区，Jandinski等人［3］利用免疫荧光技术，在正常的牙龈乳头中及中度、重度牙周炎牙龈乳头中均发现IL-1β阳性细胞数与牙周组织破坏有关。IL-1刺激骨吸收作用很强，体外作用浓度为1.3×10－12～3.1×10－10mol,半最大刺激浓度为1.4×10－11mol［1］。本研究每次以1 000u/0.1ml的剂量给药，结果表明IL-1β对牙周软组织能够引起明显的炎症反应，对牙槽骨亦具有明显的作用。应用IL-1β初期对牙槽骨既有破骨细胞产生又有成骨细胞存在，提示应用IL-1β15天左右既有显著的破骨作用，同时也有显著的成骨作用；但是在后期(应用IL-1β 30d)只表现出显著的破骨作用而无成骨作用。

责任编辑：姚红祥