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【摘要】 目的 通过对18种抗生素的筛选和活性测定,找出不同类型牙周炎治疗的最佳药物。方法 选用牙周炎主要致病菌的国际标准菌株及临床分离菌,用琼脂平板稀释法测出药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果 克林霉素、环丙沙星、二甲基四环素对各类牙周炎主要致病菌的抑菌效果均较好,而二甲基四环素的抗菌谱更为理想。结论 牙周炎急性发作时,二甲基四环素可做为首选药;并为多种抗生素的使用及研究提供了实验依据。 【关键词】 牙周炎 抗生素 最低抑菌浓度(MIC)
使用牙周炎常见致病菌的国际标准菌株,对常用的抗菌药物进行筛选,得出药物最低抑菌浓度(MIC),并选出其中三种抑菌效果好的抗生素,用临床牙周炎病人牙周袋内菌斑分离出的致病微生物,进行药物抑菌活性测定,力求在临床上对牙周炎治疗的合理用药有所帮助。
材料和方法
一、材料
1.菌株(国际标准菌株):①药敏指示菌(共2株)脆弱类杆菌:ATCC 29285;多形类杆菌ATCC 29741。②国际标准菌株(共19株)卟啉单胞菌:牙龈卟啉单胞菌:47A-1,2561,14-3-2;不解糖卟啉单胞菌:ATCC 25260;牙髓卟啉单胞菌:ATCC 35406。普氏菌:中间型普氏菌:ATCC 25261;卢氏普氏菌:ATCC 15930;躯体普氏菌:ATCC 33547。放线菌:内氏放线菌:ATCC 19039;粘性放线菌:ATCC 19246。伴放线放线杆菌:75#,ATCC 24523。嗜二氧化碳菌:牙龈嗜二氧化碳菌:ATCC 33624;黄褐色嗜二氧化碳菌:FDC-CO,ATCC 27872。血链球菌。嗜沫嗜血杆菌。韦荣氏球菌:ATCC 17743;巨核梭形杆菌:ATCC 10953。③分离菌株(临床诊断为牙周炎病人牙周袋内分离、鉴定菌株,共264株):产黑色素菌群(81株);放线菌(57株);梭形杆菌(58株);类杆菌(19株);伴放线放线杆菌(12株);韦荣氏球菌(12株);嗜沫嗜血杆菌(11株);其它厌氧菌(14株)。 2.抗菌药物(由中国药品生物制品检定所,抗生素研究室提供,共18种):①大环内酯类:红霉素,交沙霉素,麦白霉素,罗红霉素,阿齐霉素,克拉霉素,乙酰螺旋霉素。②喹诺酮类:诺氟沙星,氧氟沙星,环丙沙星,洛美沙星,左旋氧氟沙星,曲氟沙星。③硝咪唑类:甲硝唑,替硝唑。④四环素类:二甲胺四环素,强力霉素。⑤其他:克林霉素。 3.培养基:CDC固体(加5%羊血)及CDC液体,选择培养基(产黑色素菌群、放线菌、梭形杆菌、伴放线放线杆菌)。 4.细菌生化鉴定管。英国产细菌点种仪。 二、方法 1.药物筛选试验[1~3]:①菌悬液制备:把21株国际标准菌株接种在固体CDC培养基上,37℃,厌氧培养5天,取新鲜细菌菌落置2ml液体CDC培养基中,37℃,厌氧培养2天后,用液体CDC培养基稀释至106浓度待用。②药敏培养基制备:18种药物标准品有效浓度从256mg/L倍比稀释到0.0625mg/L,共13个浓度,以1ml药液加14ml培养基与加好羊血约55℃的CDC培养基混匀,铺平皿,每个药从稀到浓铺13个平皿,并设二个无药空白对照。③细菌点种:用点种仪把稀释好的菌液先点种到空白培养基上(前对照),再点种到药敏培养基上,13个浓度点种完,最后再点种到空白培养基上(后对照),放置于37℃,厌氧环境中培养5天后,观察最低抑菌浓度(MIC)。④结果判断:高度敏感:平均血药浓度超过细菌MIC的5倍;中度敏感:平均血药浓度略大于或等于细菌MIC;耐药:平均血药浓度低于细菌MIC[4]。 2.药物活性测定试验:①从临床诊断为牙周炎患者的牙周袋内取龈下菌斑,用选择培养基培养致病菌株,根据菌体形态、菌落形态及生化反应,分离出7个菌属(群)[5,6],264株致病菌。②菌悬液制备:用临床分离的264株菌制备。③药敏培养基制备:选用药物筛选试验效果好的三种抗生素(二甲胺四环素,环丙沙星,克林霉素)。④细菌点种。⑤观察264株临床分离菌株,对3种抗生素(二甲胺四环素,环丙沙星,克林霉素)的药物活性,即有效抑菌范围(MIC范围)、半数抑菌范围(MIC50)、90%抑菌范围(MIC90)。⑥结果判断:用平均血药浓度与MIC范围、MIC50、MIC90比较。
责任编辑:姚红祥 |