|
【摘 要】 目的 检测力在正常及增强状态下，大鼠牙周细胞PGE2的动态表达，初探PGE2在牙周组织改建中的分子机理。方法 采用HE染色和免疫组化的方法，观察牙周形态变化以及牙周组织中PGE2蛋白表达。结果 力增强引起牙周膜增宽、牙槽骨形成。牙周细胞中PGE2表达较正常力时明显增强。结论 力增强，促使牙周组织产生PGE2明显增多，诱发了破骨功能；同时，还激活了成骨功能。本实验从分子水平探讨了牙周组织改建的机理。
【关键词】 力；前列腺素E2；牙周组织改建；免疫组化
骨改建是一个由多种细胞、多种因素参与调控的复杂过程。机械力在骨改建中也起着重要作用。许多研究结果表明：适宜的机械力是维持正常生理性骨改建所必需的〔1〕。
牙周膜位于牙骨质和牙槽骨两种硬组织之间。咀嚼产生的力对牙周细胞产生的刺缴，不仅维持了牙周膜本身的改建，并可影响相邻牙槽骨的改建。同时力刺激牙周细胞产生的局部因子对牙周组织的改建也起着重要作用。这些因子中，前列腺素（prostaglandin E2，PGE2）被认为是参与骨改建的重要因子之一。本实验目的是研究不同力作用下，牙周组织的形态变化以及PGE2表达的动态变化。初探力增强对大鼠牙周组织PGE2表达的影响以及与牙周组织改建的分子机理。
材料和方法
动物模型
选用80只250g±20成年雄性Wistar大鼠，随机等量地分为实验组和对照组（正常力）。实验组拔除左侧上颌（B区）所有磨牙。这样，实验组动物的D区磨牙因丧失对颌牙导致力丧失，而C区磨牙功能代偿性增强则构成力增强的动物模型。两组动物分别在实验后6小时、1天、2天、3天、1周、2周、3周和4周各处死5只，共16组。
组织标本制备
实验动物采用4％多聚甲醛心内灌注的方式行内固定。取出下颌相应骨段，保留磨牙区，置于4％多聚甲醛中巩固固定6小时。将标本移至EDTA中脱钙2周。梯度乙醇脱水，石蜡包埋。标本厚5μm，裱于经硅化处理的玻片上。
实验方法
1. 组织形态学 取相应切片进行苏木素一伊红（HE）染色，在光学显微镜下观察牙周形态变化，并用显微标尺对牙周膜宽度进行测量。
2. 免疫组化 PGE2单克隆抗体（侯本祥博士赠送），ABC试剂盒（美国Vector公司）。常规免疫组化染色，DAB显色。设已知有PGE2表达的应激大鼠脾组织作阳性对照，以封闭血清代替一抗作阴性对照。
图像分析与统计学处理
采用MIAS-2000型图像分析仪，对实验组和对照组各时间点牙周膜染色强度进行测量。每个标本均选第一磨牙根为观察对象。结果用t检验进行统计学分析。
结 果
组织形态学
1. 对照组（正常力）大鼠牙周膜结构致密，纤维、细胞排列有序，成纤维细胞胞核的方向与之一致。牙槽骨骨壁较平，表面衬以连续排列的扁平成骨细胞。
2. 实验组（力增强）2周时牙周膜宽度明显增加，结构致密，其纤维、细胞的排列有序。牙槽骨骨壁凹凸不平，有活跃的骨吸收陷窝（其内可见破骨细胞），同时可见交替出现的骨形成区，成骨细胞胞核较大。3周、4周时，牙周膜无明显变化；牙槽骨骨壁较平，骨形成区更加明显，破骨细胞数量大大减少。
免疫组化
1. 对照组大鼠牙周膜成纤维细胞（PLF）和牙槽骨成骨细胞均能稳定表达PGE2，其免疫阳性信号位于胞浆内。
2. 实验组牙周膜表达PGE2的阳性强度均明显高于对照组（表1），且表达有一定的时间规律：实验1天后出现较明显的变化，然后阳性强度逐渐增大，2周达最大，随后逐渐减小，4周时基本恢复正常（图1）。同时，实验组1周时观察到成骨细胞表达明显的PGE2，2周时最强，随后逐渐减小。
表1 对照组和实验组不同实验时间牙周膜PGE2免疫组化染色灰度差值表
| 实验时间 |
对照组（正常） |
实验组（增强） |
| 6小时 |
13.1402 |
13.8259 |
| 1天 |
13.2378 |
21.6325* |
| 2天 |
12.5261 |
23.9484* |
| 3天 |
13.8486 |
28.5112* |
| 1周 |
14.0183 |
37.4503* |
| 2周 |
13.3549 |
52.3513* |
| 3周 |
14.1243 |
27.1692* |
| 4周 |
13.7311 |
15.2149 |
责任编辑：姚红祥 |