摘　要：目的　对动物颊囊癌变过程中的血管生成规律进行形态学的动态研究。方法　采用DMBA诱导的金黄地鼠颊囊癌变动物模型、树脂血管灌注及墨汁血管灌注检测癌变时的血管生成情况。结果　癌前病变及癌变期内均存在血管生成现象，并存在着随病变恶性程度增加，血管异常生成明显增加的规律。结论　血管异常生成及其严重程度与白斑癌变有关。
关键词：金黄地鼠颊囊　　血管生成　　癌前病变

材料与方法

　　材料
　　1.实验动物：叙利亚品系金黄地鼠51只，每只取双侧颊囊标本，共102例，由上海西普尔-BK公司提供。
　　2.0.5％DMBA丙酮液配置：1g DMBA溶于200ml丙酮液，混匀。
　　3.树脂预聚液配置：2％NaOH清洗后的甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸甲酯按9∶1比例混合，再加入6％的过氧化苯甲酰，75～80℃水浴5分钟，加入苏丹Ⅲ染色剂混匀。
　　4.3％明胶墨汁配置：30g明胶溶于1000ml墨汁中，70～80℃水浴溶解。
　　5.KS400图像分析系统（Video Image Digital Analysis System)由德国远东蔡司公司（ZEISS）提供。
　　方法
　　1.实验动物分组：空白对照组：9只，常规饲养，双侧颊囊涂布0.9％NaCl液，于4～9周后处死，取双侧颊囊标本共18例。
　　模型组：42只，常规饲养，双侧颊囊涂布0.5％DMBA丙酮液，于4～9周后处死，取双侧颊囊标本共84例。
　　2.树脂血管铸型制作：
　　氯胺酮（2ml/kg）腹腔麻醉动物。开胸、暴露心脏、经左心室插管至升主动脉，结扎降主动脉，切开右心房，35～37℃生理盐水自导管灌注冲洗血管，以12～15kPa压力灌入树脂预聚液，结扎上腔静脉、升主动脉。动物置60℃水浴30分钟，取双侧颊囊，40％KOH液腐蚀2小时，流水冲洗，置50％甘油液2小时→100％甘油保存。双目解剖镜下观察血管形态。
　　3.明胶墨汁血管灌注
　　动物按树脂灌注前步骤处理后，灌注3％明胶墨汁,取双侧颊囊涂药区组织块，10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下病理分级，标准参照1978年WHO口腔癌前病变协作中心诊断标准。每例标本在KS400图像分析系统中测量邻近3个视野内的血管密度值（血管个数／mm2）和血管面积密度值（血管内腔面积和／视野面积×100％），取平均值。
　　4.统计学处理
　　数据采用x2检验，单因素方差分析，Duncan法组间两两比较进行分析。

结　果

　　1.肉眼观察颊囊粘膜、血管变化及光镜下病理分级结果。
　　1.1 肉眼观察
　　空白对照组地鼠颊囊粘膜光滑红润，薄而有弹性，粘膜下血管清晰。模型组地鼠颊囊涂DMBA第4～5周时先后出现充血、糜烂；第6～7周出现不同程度粘膜粗糙、肥厚、白色斑块或疣状损害；第8～9周出现乳突状新生物，逐渐长大成菜花状肿块。
　　1.2 树脂血管铸型观察
　　空白对照组颊囊血管网中各级血管排列稀疏、均匀。模型组：4～5周组血管未见明显变化;6～7周组血管密度略为增加，个别部位见管径增粗，少量新生血管形成，局部有树脂渗漏现象；8～9周组血管网发生明显改变，各级血管排列稠密，不均匀，出现扭曲、扩张毛细血管，以至毛细血管团，新生血管芽多见，树脂多向管外渗漏。
　　1.3 光镜下组织学观察
　　12例空白对照组地鼠颊囊粘膜标本均为正常粘膜上皮；72例模型组地鼠颊囊粘膜标本中，炎症为11／72，轻、中、重度异常增生依次为21／72、19／72、16／72，鳞癌为5／72。
　　表1示：涂DMBA第4～5周，炎症和轻度异常增生居多，占16／24；第6～7周，中、重度异常增生比例上升，占15／24；第8～9周中、重度异常增生和鳞癌占16／24。　　

表1　涂DMBA不同周数组间动物颊囊粘膜光镜下病理分级（例）

 

涂DMBA 周 数	病　　理　　分　　级					合计
	炎症	轻度异 常增生	中度异 常增生	重度异 常增生	癌
第4周 第5周 第6周 第7周 第8周 第9周 合 计	2 4 0 2 3 0 11	6 4 2 4 2 3 21	0 4 5 3 4 3 19	2 0 4 3 2 5 16	2 0 1 0 1 1 5	12 12 12 12 12 12 72

责任编辑：姚红祥