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1.6 抗体对粘放菌与血链球菌34凝集的抑制
分别吸取粘放菌5951、T14V菌液于3支试管中(OD650 nm=1.0,1 ml/支),两种菌液的各3支试管中分别加入αⅠIgG(50 μg/ml,1 ml)、αⅡIgG(50 μg/ml,1 ml)、αⅠIgG和αⅡIgG(50 μg/ml各0.5 ml),充分混匀数分钟后,离心,弃上清。吸附过抗体的细菌加入凝集缓冲液1 ml/支,振动打散细菌后分别加入1 ml血链球菌34(OD650 nm=1.0)。阳性对照为未吸附过抗体的粘放菌5951和T14V(1 ml/支),分别加入1 ml血链球菌34。阴性对照为粘放菌5951、T14V、血链球菌34菌液各2 ml。将菌悬液在试管内充分混匀,室温静置30分钟～1小时,取上层菌液0.6 ml,测定OD650 nm值。所有实验均重复2次,取均数,计算凝集百分率及凝集抑制率［6］。
2 结 果
2.1 两种菌毛在粘放菌粘附SHA中的作用
两种菌毛提取过程中不同阶段提取物对粘放菌粘附SHA均有不同程度的抑制,见表1。同时表明,随着菌毛纯化程度的增加,对粘放菌粘附SHA的抑制率也相应增加。
表1 不同纯化阶段Ⅰ、Ⅱ型菌毛提取物
对粘放菌粘附SHA的影响
菌株
(菌毛表达) |
粘附抑制率(%)* |
| 上清粗提物 |
20%硫酸铵沉淀物 |
纯化菌毛 |
| 5519(1+2-) |
6.9 |
14.4 |
31.2 |
| 5951(1-2+) |
6.4 |
12.3 |
28.6 |
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注 以空白对照组的粘附为100%,计算阳性组、实验组的粘附相对百分率
抗Ⅰ型菌毛IgG和抗Ⅱ型菌毛IgG对粘放菌粘附SHA的影响结果见表2。结果表明:单一的抗Ⅰ型菌毛IgG或抗Ⅱ型菌毛IgG能抑制有相应菌毛的粘放菌变异株对SHA的粘附,不能完全抑制有两种菌毛的粘放菌T14V对SHA的粘附;当两种抗体共同作用时,则对粘放菌T14V的粘附抑制率明显增加。
表2 抗菌毛抗体对粘放菌粘附SHA的影响 |
菌株
(菌毛表达) |
粘附抑制率(%) |
| αⅠIgG |
αⅡIgG |
αⅠIgG+αⅡIgG |
| 5519(1+2-) |
85.6 |
14.2 |
/ |
| 5951(1-2+) |
12.1 |
75.6 |
/ |
| T14V(1+2+) |
31.6 |
16.5 |
71.2 |
2.2 两种菌毛在粘放菌与血链球菌34凝集反应中的作用
当纯化菌毛直接与血链球菌34作用时,两种菌毛不能引起血链球菌34肉眼可见的凝集。当纯化Ⅱ型菌毛与相对应的抗5951抗血清形成免疫复合物后,引起血链球菌34的凝集;而纯化Ⅰ型菌毛采用同样的处理方法,则无此现象。
抗Ⅰ型菌毛抗体对有两种菌毛的粘放菌T14V与血链球菌34的凝集反应无影响,而抗Ⅱ型菌毛抗体对粘放菌5951、T14V与血链球菌34的凝集反应有明显抑制作用(表3)。
表3 抗菌毛抗体对粘放菌与血链球菌34
凝集反应的影响 |
菌株
(菌毛表达) |
凝集抑制率(%)* |
| αⅠIgG |
αⅡIgG |
αⅠIgG+αⅡIgG |
| 5951(1-2+) |
0 |
95.6 |
/ |
| T14V(1+2+) |
0 |
85.6 |
29.3 |
|
* 
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3 讨 论
粘放菌在口内主要定植于牙面,特别是根面,而且加速菌斑的形成,这与粘放菌菌毛的生物性能密切相关。
早期研究［1］表明,粘放菌菌毛在粘放菌粘附牙面中有着重要的作用。Clark等［7］通过抗粘放菌T14VⅠ型菌毛的抗体能抑制粘放菌对SHA的粘附,且能促进已粘附于SHA上的粘放菌解吸附,而抗Ⅱ型菌毛的抗体无此作用,认为Ⅰ型菌毛介导粘放菌粘附于SHA,Ⅱ型菌毛与粘附SHA无关。Cisar等［8］研究也认为Ⅰ型菌毛具有对SHA的粘附性能,Ⅱ型菌毛对SHA呈弱或无粘附现象。但最近,Strmberg等［9］研究认为Ⅱ型菌毛以一种对GalNAcβ敏感的方式介导放线菌对SHA的粘附。赵丽娟等［10］研究表明,牙面获得性膜中,既有Ⅰ型菌毛受体,又有Ⅱ型菌毛受体。两种菌毛共同参与粘放菌对牙面的粘附,不同菌毛上粘结素作用于获得性膜上不同的位点。
本实验首先采用提取的两种菌毛分别进行粘附抑制实验。在菌毛与SHA充分作用后,再加入粘放菌。结果显示,两种菌毛均对粘放菌粘附SHA有抑制作用。说明SHA上部分位点被事先加入的菌毛所占据,使后加入的粘放菌粘附量下降。由此可判断,两种菌毛均具有对SHA的粘附性能。进一步进行抗体对粘放菌粘附SHA的抑制实验,则再次证实两种菌毛均能介导粘放菌粘附于牙面。
责任编辑：姚红祥 |