我们采用SDS-PAGE垂直电泳及特殊染色方法，对牙龈卟啉菌可溶性抗原进行分子水平的化学分析，运用免疫印迹技术寻找出有较强特异性的靶抗原，以期对牙龈卟啉菌的致病免疫机制有进一步了解。

    1.材料与方法：

    (1)病例选择及血清制备：选择本院牙周病专科门诊诊断为中度以上成人牙周炎患者15例，平均年龄34.5岁；10名35岁以下身体健康，无口腔疾患者为对照组。空腹静脉抽血，分离血清，-50℃保存。

    (2)抗原制备：将牙龈卟啉菌国际标准株47A-1接种于BHI血琼脂培养基，大量增菌，收集菌体，超声震碎至90%细胞完全破碎，离心收集上清液，即为全细胞可溶性蛋白抗原。

    (3)SDS-PAGE电泳：采用Laemmli Tris/HCl系统，分离胶12.5%，浓缩胶4.8%，电泳结束后，取出凝胶，全蛋白染色用考马斯亮蓝法；糖蛋白显色用过碘酸—氨银染色；脂蛋白显色用耐而蓝染色。

    (4)免疫印迹电泳：将SDS-PAGE电泳分离的可溶性 抗原凝胶转移至硝酸纤维膜上，进行转移电泳。电泳后取出硝酸纤维膜用牛血清白蛋白封闭1小时后，在膜上进行酶联免疫吸附实验，最后将膜置入3，3-二氨基联苯胺显色，终止反应。

    2.结果：

    (1)全蛋白组分分子量测定：牙龈卟啉菌可溶性蛋白经SDS-PAGE分离，至少可见20条蛋白区带，分子量范围为(9.4～1.1)×104。

    (2)糖蛋白组分分析：显示8条糖蛋白区带，分子量范围为(9.4～1.1)×104。

    (3)脂蛋白组分分析：显示8条脂蛋白区带，分子量范围为(6.4～1.1)×104。

    (4)免疫印迹观察：患者血清半数与分子量7.8×104，6.4×104，5.0×104，4.0×104，3.2×104，2.5×104等抗原区带呈阳性反应，与7.8×104，5.0×104，4.0×104蛋白区带呈阳性反应，百分率为73%～86%；健康对照组血清与相应的蛋白区带阳性反应不及半数，最高百分率为40%。

    3.讨论：本研究表明，中高分子量抗原可能是重要抗原，其中7.8×104，5.0×104，4.0×104的蛋白区带为特异性强的重要蛋白抗原，均为糖蛋白。Lao-scrisin发现成人牙周炎(AP)患者血清抗体常与细菌高分子量蛋白抗原发生反应；快速进展型牙周炎(RPP)则与低分子量蛋白抗原发生反应，提示不同类型牙周炎血清免疫反应不同。某些学者认为在牙周病变早期，低分子量细菌蛋白抗原可能为主要抗原，因为低分子量蛋白可以快速穿入人体或具有更大免疫原性，而机体吞噬系统尤其是B细胞免疫对小分子蛋白抗原有较早的免疫应答。有关牙龈卟啉菌的特异蛋白复合物在宿主体内的免疫反应模式尚待深入研究。

作者单位： 110002 沈阳，中国医科大学口腔医院(潘亚萍)；华西医科大学口
腔医学院(章锦才、肖晓蓉)

责任编辑：姚红祥