唾液富组蛋白的分离纯化及抗菌活性观察

作者:罗海燕 黄 宁 杨美薷 唐 彬 吴 琦 王伯瑶  文章来源:华西口腔医学杂志 

2007-12-10 16:56:39         【博客】 【论坛】 【投稿】 【打印】 【关闭


  本实验采用Lehrer等建立的微量而敏感的琼脂糖弥散法研究HRPs的抗菌活性,结果显示HRPs对变形链球菌具有较强的抗菌活性。3种主要HRPs中,HRP-3及HRP-5的抗变形链球菌活性强于HRP-1,表明前二者是HRPs中的主要抗变形链球菌成分,这与国外学者的报道相一致[8]。且HRPs对变形链球菌的抗菌活性大于其它菌株,这可能是由于变形链球菌代谢产酸,而在低pH环境下,HRPs的杀菌活性增强[9]。这充分说明HRPs作为仅存在于唾液中的抗菌活性多肽,可能在宿主抗龋机制中发挥重要作用。
  1997年,吴琦等[10]报道了人腮腺唾液对一些常见的化脓性感染致病菌的抗菌活性,并证实其中的有效抗菌分子主要是HRPs。本实验将3种主要HRPs分离纯化,进一步定量测试它们的抗菌活性,结果发现:HRP-1对金黄色葡萄球菌有抗菌活性,对大肠杆菌和绿脓杆菌无抗菌活性;而HRP-3及HRP-5对上述3株细菌均有明显抗菌活性。各种细菌对HRPs的敏感性为:金黄色葡萄球菌大于大肠杆菌大于绿脓杆菌。值得一提的是,本实验所采用的大肠杆菌ML-35 P株,是氨苄青霉素耐药株,但对HRPs这种内源性的抗菌肽却很敏感。
  Dabbagh等[11]曾报道健康人全唾液中HRPs的含量为3~167 μg/ml,而本实验中HRPs发挥抗菌作用的浓度在口腔中的生理浓度范围之内。以上结果说明HRPs为一组内源性广谱抗菌活性多肽,对G+和G-菌,包括一些抗生素耐药株,都有抗菌作用,可能是宿主对抗口腔微生物感染的重要分子,在预防口腔内伤口化脓性感染及消化道感染方面也可能有一定意义。
  从以上结果还可发现,HRPs的不同组分对不同属性的细菌具有不同的抗菌活性。HRP-1对G+的变形链球菌和金黄色葡萄球菌有抗菌活性,而对G-的大肠杆菌和绿脓杆菌无抗菌活性。HRP-3和HRP-5对上述4种细菌均有抗菌作用。因此,对于其抗菌作用机理,还值得进一步研究。

本实验为国家自然科学基金资助项目(编号 39670305)

作者单位:罗海燕 华西医科大学口腔医学院 (现在北京医科大学口腔医学院病理研      究室,杨美薷) 610041
     黄 宁,唐 彬,吴 琦,王伯瑶  华西医科大学感染与免疫研究室

参考文献

1 赵心臣综述.唾液富组蛋白.国外医学口腔医学分册,1995,22(1):24~27
2 胡云明综述.唾液富组蛋白在口腔疾病中的作用.国外医学口腔医学分册,1995,22(4):200~203
3 Panyim S, Chalkley R. High resolution acrylamide gel electrophoresis of histon. Arch Biochem Biophys, 1969, 130(1):337~346
4 Schagger H, Jagow G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal Biochem, 1987, 166(2):368~379
5 Lehrer RI, Rosenman M,Harwig SS,et al.Ultrasensitive assays for endogenous antimicrobial peptides.J Immunol Meth,1991,137(2):167~173
6 Oppenheim FG, Xu T, McMillan FM, et al. Histatins, a novel family of histidine-rich proteins in human parotid secretion. isolation, characterization, primary structure and fungistatic effects on Candida albicans. J Biol Chem, 1988, 263(16):7472~7477
7 吴 琦,王伯瑶,王偕秀,等.兔中性粒细胞抗菌肽的纯化和鉴定.华西医科大学学报,1990,21(2):59~62
8 Payne JB, Iacono VJ, Crawford IT, et al. Selective effects of histidine-rich polypeptides on the aggregation and viability of Streptococcus mutans and Streptococcus sanguis. Oral Microbiol Immunol, 1991, 6(3):169~176
9 Xu T, Levitz SM, Diamond RD, et al. Anticandidal activity of major human salivary HRPs.Infect Immun, 1991, 59(8):2549~2554
10 吴 琦,杨美薷,钟德钰,等.腮腺唾液富组蛋白抗菌活性的研究.中华口腔医学杂志,1997,32(6):356~359

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责任编辑:姚红祥  

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