［摘　要］目的：观察甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)对体外培养17d的胎鼠下颌第一磨牙牙胚分化发育的影响，探讨PTH在成牙本质细胞分化和牙本质形成中的作用。方法：器官培养、组织学观察和透射电镜观察。结果：体外培养的牙胚可出现成牙本质细胞分化和牙本质形成。PTH可促进成牙本质细胞的分化，细胞分化的程度和速度均高于对照组；在PTH的作用下，细胞的超微结构观察发现细胞分化良好，明显处于功能活跃状态。结论：牙胚培养在观察生长因子对牙齿发育的作用研究是有效的,PTH在牙齿发育中具有一定的促进作用。
　　［关键词］甲状旁腺激素；牙胚；成牙本质细胞；器官培养

　　牙胚的发育和细胞的分化是通过釉上皮-牙乳头间充质细胞之间的一系 列相互作用引起 的，并受多种因素的调节［1］。将处于牙齿发育阶段的胚胎性上皮组织和间充质细 胞（牙胚）在体外进行培养，是观察组织诱导作用的主要方法之一。体外牙胚的培养成功， 为研究体外成牙本质细胞分化提供了非常理想的实验模型。
　　甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)等亲钙激素是维持全身钙、磷水平的重要因子， 牙齿是全身矿化组织之一，它们在牙齿形成和维持中的作用已开始引起学者的广泛重视。本 文观察PTH对体外培养牙胚发育的影响，探讨PTH在成牙本质细胞分化和牙本质形成中的作用 。

1　材料和方法

1.1　材料
　　纯系SD大鼠(本校实验动物中心)；
　　甲状旁腺激素(Bachem，Japan)；
　　DMEM培养基(Gibco，USA)。
1.2　方法
1.2.1　鼠牙胚的获取
　　将未怀孕的母鼠和公鼠同笼，第2天取出公鼠，选择怀孕母鼠并计算孕期。将怀孕17 d的SD母 鼠拉颈处死。取出鼠胚胎，置750ml/L乙醇中消毒10s，从颈部横断，鼠胚头端用DMEM培养液 冲洗，无菌条件下用挖匙取出鼠胚下颌第一磨牙牙胚，置含100ml/L?FCS的DMEM培养液中 保存。
1.2.2　牙胚的体外培养
　　在24孔细胞培养板中进行培养，每孔培养液1ml，将0.45μm孔径的微孔滤膜用不锈钢支 架置气－液界面，将分离完整的牙胚置于微孔滤膜上，在标准环境下培养，培养液每3天换1 次，培养时间为3、6、9d。
1.2.3　实验分组
　　对照组：培养液为含150ml/L?FCS、10mmol/L β-磷酸甘油和50mg/L抗坏血酸的DMEM培养 液。
　　实验组：用对照组培养液将PTH稀释,浓度为33.3nmol/L。
　　每组每个时间点2孔，每孔5个牙胚。
1.2.4　取材和观察
　　培养的牙胚分别于3、6、9d终止培养，每孔取3个(每时间点6个)牙胚。40g/L多聚甲醛(pH7.3)固定，常规包埋切片，部分切片进行HE染色，光镜观察。每孔的另外2个牙胚与培养 前的2个鼠牙胚用30ml/L戊二醛固定2h，丙酮系列脱水，真空干燥，以Epon812环氧树脂包埋 ，超薄切片，染色后透射电镜下观察。

2　结果

2.1　光镜观察
　　在牙胚培养开始时，磨牙牙胚发育处于帽状期，内釉上皮由立方状或柱状细胞构成，牙 乳头间充质细胞尚未分化为成牙本质细胞，在内釉上皮和邻近的间充质细胞之间也未出现牙 本质或牙本质样基质(图1)。

图1　大鼠牙胚开始培养时的组织像　(HE，10×)

　　培养3d标本：对照组内釉上皮呈柱状，但还不是前期成釉细胞；部分与之邻近的牙乳头 间充质细胞变为立方状，细胞核开始偏极，分化为前成牙本质细胞，未发现牙本质基质分泌 或牙本质形成(图2)。实验组与对照组基本相似，但大部分与内釉上皮邻近的牙乳头间充质 细胞变为立方状，细胞核发生偏极，分化为前期成牙本质样细胞，内釉上皮和间充质细胞 间开始有少量牙本质基质出现(图3)。

图2　对照组大鼠牙胚培养3d时的组织像　(HE，10×)

图3　实验组大鼠牙胚培养3d时的组织像(HE，40×)

　　培养6d标本：对照组内釉上皮已分化为前期成釉细胞，细胞核位于近端；上皮-间质出现少 许牙本质基质，与这些基质对应的间质侧出现紧密排列、呈高柱状的成牙本质细胞(图4)。实验组成釉细胞分化良好，上皮-间质出现明显牙本质基质，成牙本质细胞呈高柱状，紧密 排列于与基质对应的间质侧，细胞偏向远中端，个别成牙本质细胞突起伸入基质(图5)。

责任编辑：姚红祥