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图4 对照组大鼠牙胚培养6d时的组织像 (HE，10×)
图5 实验组大鼠牙胚培养6d时的组织像(HE，40×)
培养9d标本：对照组有较多的牙本质基质形成，部分成牙本质细胞突起埋入牙本质基质 中，但牙乳头细胞开始出现退变(图6)。实验组有更多的牙本质基质形成，且有较多成牙本 质细胞突起伸入基质中，成牙本质细胞排列更为紧密，呈典型的高柱状分泌细胞形态，细胞 核偏远中，牙乳头中央部分组织发生退变(图7)。
图6 对照组大鼠牙胚培养9d时的组织像 (HE，10×)
图7 实验组大鼠牙胚培养9d时的组织像(HE，20×)
2.2 TEM观察
培养前细胞呈长梭形，核卵圆，核内染色质分布均匀，核周有粗面内质网，线粒体呈长 条形，双层膜结构完整清晰，排列规则(图8)。实验组和对照组细胞的超微结构基本相似， 细胞的胞浆内可见大量高尔基氏器位于中央区，其成熟面有密度不等的泡状结构；有时可见 细胞呈长柱状，有大量的粗面内质网和线粒体沿细胞长轴分布；还可见极化的细胞核；胞间 基质中可见胶原纤维呈束排列，并有致密小体的泡状结构，类似于基质小泡。但在这些结构 出现的时间和数量上，两组存在差异，实验组明显早于并多于对照组(图9、10)。提示在 PTH的作用下，细胞分化良好，明显处于功能活跃状态。
图8 大鼠牙胚培养前时的超微结构(TEM，20K×)
图9 对照组大鼠牙胚培养6d时的超微结构(TEM， 25K×)
图10 实验组大鼠牙胚培养6d时的超微结构像(TEM，20K×)
3 讨论
牙胚是发育生物学研究领域最完整最有意义的实验模型之一。它易于培养，可进行细胞学和 分子生物学研究。体外牙胚的培养为研究外、中胚层相互作用和诱导分化提供了理想的模型 。目前，已成功地培养了多种动物的牙胚、牙乳头细胞和牙囊细胞。牙胚的体外培养已广泛 地用于不同因子对牙齿发育和硬组织矿化影响的研究，培养的牙胚也成为研究影响细胞分化 因子的有效模型［2］。
在牙胚的发育过程中，中胚层与外胚层相互作用，首先形成牙板，经过蕾状期、帽状期 、钟状期、硬组织形成期，最后萌出，发挥咀嚼功能。中胚层的牙乳头间充质细胞分化为成 牙本质细胞。为了能够观察牙乳头间充质细胞分化的关键过程，确定各种动物牙胚的发育时 序非常重要。目前，小鼠、大鼠、豚鼠、兔和人等的牙胚发育时序已较为明确。其中大鼠牙 胚是常用的实验模型之一，大鼠牙胚在孕12.5d形成牙板，14d处于蕾状期，17d为钟状期，2 0d 为萌出前及前期牙本质形成期，出生后2d为牙釉质和牙本质形成期。但牙胚在体外培养时， 其 发生发育过程不同于体内。Bronckers［3］等经过较系统地观察证实：体外培养的牙 胚，其组织细胞的分化程度、形态的发育速度约为体内时的一半，只有成釉器才能诱导 间充质细胞向成牙本质细胞的分化，而前期牙本质可以维持成牙本质细胞处于极化状态。
牙胚培养常采用Trowell型培养支架［2］，即将微孔滤膜置于不锈钢金属网架上 ，牙胚在滤膜上培养，培养液液面与滤膜平齐或略高，但以不浸没牙胚为宜，以使牙胚 获得较高的氧分压。培养液主要由培养基(DMEM或MEM等)、血清和维生素组成。
Lesot［4］等发现肝素能延迟体外培养的鼠牙胚成牙本质细胞的分化。Chai等［5］观察PDGF-A、PDGF受体在胎鼠下颌骨发育的效应和表达，认为内源性PDGF-A和P DGF受体能够调节牙齿发育的大小和速度。同时，外源性aFGF对离体牙胚作用的实验结果与P DGF-A相似［6］，也可调节牙齿发育。Mayo等［7］报道表皮生长因子和TGF- β均明显使牙胚发育的体积减小。有人［8～9］将BMP2和bFGF蛋白的凝胶与牙齿外胚 间充质共同培养24h，发现两种生长因子的作用与牙齿外胚层的作用相似，能诱导外胚间充 质细胞的增殖和形态的发生。郝建军［10］发现外源性的bFGF可以促进大鼠牙胚的 发育和细胞分化，加快牙齿发育的速度。这些结果提示牙胚培养在观察生长因子对牙齿发育 的作用研究是有效的,牙齿的生长发育受到多种因子的调节。
责任编辑：姚红祥 |