核酸的分离纯化要求保证被分离纯化的DNA具有完整的一级结构，无其它分子污染。即需要去除掉对酶有抑制作用的有机溶剂、高浓度的金属离子、生物大分子(如蛋白质、脂类等)和其它核酸分子(如RNA）。不同的实验对核酸纯度的要求不同，对用于真核转染和转基因动物的质粒纯度要求极高。获得高纯度的质粒DNA对基因免疫具有重要意义。
　　本实验重复使用玻璃纤维层析柱12次抽提质粒，获得的质粒在浓度和纯度上均无明显差异，并且均能被内切酶充分酶切，重新连接后能较好地被转化。结果表明，玻璃纤维层析柱能够多次重复使用。成品质粒纯化试剂盒和厂商出售的玻璃纤维层析柱为一次性用品而且较贵，对需要大量高纯度质粒DNA做基因免疫的研究者来说，使用上受到一定的限制。多次重复使用玻璃纤维层析柱，能有效地降低成本，充分合理地利用课题经费。
　　重复使用玻璃纤维层析柱需要注意以下几点：①每次用于抽提质粒的菌液量勿过大。成品出售的该类产品每个能吸附15μg左右的核酸，使用菌液量在2 ml左右。②建议使用分析纯级试剂配制溶液。③重复使用层析柱前，应用TE缓冲液充分洗柱2～3次。④重复抽提的质粒应为同一质粒，以避免混杂其它DNA。

本课题为国家自然科学基金资助项目(编号 39770797)

作者单位:610041　华西医科大学口腔医学院

(本文图2,3见中心插页16)

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责任编辑：姚红祥