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BglⅠ与SacⅠ同样能切下含部分A区的片段，但使用前者可以得到A区三个串联重复片段中的第三个完整片段（A－3片段），而后者只能切下A－3片段的一部分，因此如有必要使用这两个酶中的一个，选择BglⅠ似乎更为合适。
三、起始/终止密码
构建pac DNA重组体的主要目的是使pac基因得到表达，而目的产物蛋白质的表达是通过对克隆化基因的翻译得以实现的。在此过程中，起始密码与终止密码起着极其重要的作用。为了便于进行pac基因克隆化的工作，在此列出pac全基因中所有三种阅读框的起始密码ATG与终止密码TAA的位点以供参考：
表4 pac基因内起始与终止密码 (ATG & TAA) |
| ATG |
1 |
116 |
137 |
253 |
305 |
326 |
338 |
| |
344 |
464 |
476 |
530 |
541 |
575 |
584 |
| |
605 |
659 |
734 |
755 |
779 |
809 |
830 |
| |
851 |
905 |
980 |
986 |
001 |
025 |
034 |
| |
1076 |
082 |
097 |
118 |
151 |
226 |
232 |
| |
1247 |
271 |
280 |
322 |
328 |
433 |
484 |
| |
1529 |
1544 |
1568 |
1598 |
1601 |
1634 |
1658 |
| |
1691 |
1694 |
1708 |
1718 |
1779 |
1853 |
2018 |
| |
2042 |
2066 |
2116 |
2177 |
2182 |
2189 |
2242 |
| |
2271 |
2285 |
2303 |
2323 |
2342 |
2372 |
2377 |
| |
2392 |
2423 |
2456 |
2477 |
2546 |
2591 |
2663 |
| |
2708 |
2780 |
2825 |
2897 |
3119 |
3209 |
3218 |
| |
3224 |
3278 |
3338 |
3341 |
3380 |
3383 |
3389 |
| |
3404 |
3437 |
3497 |
3512 |
3548 |
3623 |
3629 |
| |
3683 |
3689 |
3695 |
3761 |
3836 |
3845 |
3883 |
| |
3901 |
3923 |
3956 |
3962 |
3986 |
4013 |
4049 |
| |
4055 |
4154 |
4157 |
4163 |
4384 |
4436 |
4619 |
| |
4627 |
| TAA |
30 |
36 |
45 |
147 |
213 |
276 |
309 |
| |
348 |
351 |
363 |
402 |
435 |
456 |
492 |
| |
504 |
519 |
552 |
573 |
594 |
612 |
732 |
| |
777 |
858 |
884 |
903 |
933 |
990 |
1023 |
| |
1065 |
1086 |
1149 |
1179 |
1236 |
1269 |
1311 |
| |
1332 |
1359 |
1413 |
1418 |
1449 |
1479 |
1499 |
| |
1581 |
1674 |
1689 |
1734 |
1757 |
1764 |
1776 |
| |
1830 |
1857 |
1869 |
1899 |
2013 |
2055 |
2064 |
| |
2091 |
2103 |
2121 |
2136 |
2205 |
2211 |
2247 |
| |
2319 |
2337 |
2375 |
2409 |
2453 |
2460 |
2475 |
| |
2484 |
2493 |
2517 |
2535 |
2564 |
2760 |
2985 |
| |
3009 |
3030 |
3039 |
3063 |
3078 |
3171 |
3222 |
| |
3231 |
3276 |
3291 |
3336 |
3354 |
3360 |
3396 |
| |
3429 |
3447 |
3456 |
3459 |
3468 |
3477 |
3483 |
| |
3486 |
3516 |
3554 |
3576 |
3687 |
3693 |
3720 |
| |
3729 |
3771 |
3789 |
3819 |
3891 |
3954 |
3984 |
| |
3993 |
3999 |
4005 |
4022 |
4047 |
4074 |
4086 |
| |
4197 |
4227 |
4262 |
4296 |
4314 |
4425 |
4442 |
| |
4538 |
4610 |
讨 论
S.mutans因与龋病的高度相关性而一直为研究者们所重视。不断有学者从事相关微生物及免疫学研究，以期找到其可用抗原成分，从而研制出防龋疫苗以从微生物环节阻止龋病的发生。c血清型S.mutans细菌表面蛋白抗原PAc由于参与介导了细菌与牙表面获得性膜之间的粘附过程被视为S.mutans的重要毒力因子，而且又与哺乳动物心肌无交叉免疫反应，因此被视为构建防龋疫苗的合适抗原之一。
在运用基因工程预防龋病方面，樊明文等在国内首先开展了基因重组防龋的研究工作，为龋病预防开辟了一条新的途径［2～6］。为了使龋病的重要相关菌S.mutans的表面蛋白编码基因pac的遗传学背景更加清晰，以利于运用分子克隆技术构建pac DNA重组体疫苗，本文通过运用DNASIS计算机软件包对pac全基因DNA序列进行了酶切图谱、开放阅读框、遗传密码子、编码蛋白等一级结构参数分析，并参考有关文献对pac基因分子克隆的背景资料进行了研究分析。
1989年Okahashi等完成了pac基因的DNA序列测定。在pac基因内，A区和P区的保守性将可能对合成防龋疫苗有重要的意义。1993年Okahashi合成了覆盖A区一个重复单位的连续重叠合成十肽，再用PAc抗血清进行抗原决定簇分析，结果在A区发现了多个决定簇［7］。1994年Matsushita等合成了覆盖整个PAc 分子的重叠十肽，在覆盖A区的十肽中有多个与人抗PAc 血清抗体显示阳性反应。在覆盖中间区的十肽中，有数个与血清抗体发生强阳性反应，该二区域内的抗原决定簇可能与人类抗PAc 蛋白的体液应答相关［8］。1998年Brandy等发现，P区的缺失可导致S.mutans表面蛋白分子抗原性减弱及在其表面的表达缺失，从而证实了P区对S.mutans表面蛋白抗原完整性具有重要意义［9］。因此，在从pac基因上制取目的基因片段时，最好选择可切下尽可能完整的A区和/或P区的限制性核酸内切酶，从而保证PAc 蛋白的抗原性能得到最大程度的保留。
责任编辑：姚红祥 | 
