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现已知抑癌基因p16的编码产物P16蛋白可通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶CDK4的活化而使细胞停滞在G1期,从而抑制细胞的增殖［1,2］。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是DNA聚合酶σ的辅助蛋白,对细胞增殖的启动有重要意义［3］。目前PCNA常作为反映细胞增殖水平的可靠指标。本文研究口腔粘膜鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)及白斑(leukoplakia, LK)P16蛋白及PCNA的表达,以了解P16蛋白表达对口腔粘膜增殖水平的影响及其与口腔粘膜SCC发生、发展过程的关系。
1 材料和方法
所有标本均选自河南医科大学第一附属医院病理科1990～1997年存档的蜡块。选取32例口腔粘膜白斑,其中单纯增生性白斑8例,不典型增生性白斑24例;口腔粘膜SCC43例,其中Ⅰ级13例,Ⅱ级19例,Ⅲ级11例。以上标本均经两位病理科医师双盲法阅片并诊断一致。6例正常口腔粘膜作为实验对照。
P16蛋白单抗(Santa Cruz公司)、PCNA单抗(DAKO公司)、免疫组化染色用SP试剂盒,均购自北京中山生物技术公司。免疫组化染色步骤按SP试剂盒说明。每批染色均设阳性对照及阴性对照。
PCNA染色以细胞核内出现棕黄色颗粒状或弥漫性着色为阳性细胞,细胞浆不着色。P16蛋白阳性细胞细胞浆和细胞核均可染成深浅不等的棕黄色,出现其一即为阳性细胞。对PCNA染色,同时计算PCNA阳性指数,即阳性细胞占总计数细胞的百分率。
2 结 果
2.1 P16蛋白免疫组化染色结果
正常粘膜组均为P16蛋白阳性表达,阳性细胞分布于上皮各层次,胞核和胞浆均为阳性。单纯增生性白斑与正常对照组相似,但染色强度明显增加,角化层以下各层呈现一均匀的棕黄色带状,阴性细胞少见。不典型增生性白斑胞浆表达与单纯增生性白斑相似,但胞核表达出现异质性,表现为有的胞核染色较深,有的胞核着色较浅或为阴性。
37.21%(16/43)的口腔粘膜SCC表现为P16蛋白染色阴性,即胞浆和胞核均为阴性。阴性标本见于SCCⅡ级及Ⅲ级,但SCCⅠ级均为阳性表达。口腔SCC P16蛋白染色阳性切片异质性更趋明显,可见较多的核阴性细胞散在分布。P16蛋白染色结果见表1。
表1 口腔粘膜鳞癌及白斑P16蛋白表达
| 组别 |
例数 |
P16蛋白阳性 |
% |
| 正常对照组 |
6 |
6 |
100.00 |
| 白斑 |
32 |
32 |
100.00 |
| 鳞状细胞癌 |
43 |
27 |
62.79 |
| Ⅰ级 |
13 |
13 |
100.00 |
| Ⅱ级 |
19 |
12 |
63.16* |
| Ⅲ级 |
11 |
2 |
18.18* |
|
* 两者之间有显著性差异(P<0.05)
2.2 PCNA染色结果
本实验各组标本均为PCNA染色阳性。正常口腔粘膜PCNA阳性细胞见于基底层细胞,呈线状排列,数量较少,其它细胞层未见阳性反应。单纯增生性白斑阳性细胞数较正常口腔粘膜增加(P<0.05),阳性细胞也主要分布于基底层,但有25%的病例除基底层以外棘细胞层也出现数量不等的阳性细胞。作者称此为基底上层模式。不典型增生性白斑阳性细胞数较单纯增生性白斑明显增加(P<0.01),分布范围较广。不典型增生性白斑多表现为基底上层分布模式。
口腔SCC各组PCNA阳性细胞分布大致与细胞分化程度有关。高分化SCC阳性细胞主要分布于基底样增生活跃的癌巢周边,癌巢中央多为阴性。低分化鳞癌阳性细胞散在分布,遍布于组织全层,数量明显增多。各组PCNA染色模式及阳性指数见表2。
表2 口腔粘膜鳞癌及白斑PCNA表达 |
| 组别 |
例数 |
基底上层
模式(%) |
PCNA阳性指数
 ±s(%) |
| 正常对照组 |
6 |
0(0.00) |
8.02±1.23b |
| 白斑 |
32 |
22(68.75) |
22.49±11.73b |
| 单纯增生 |
8 |
2(25.00)a |
11.71±2.23c |
| 不典型增生 |
24 |
20(83.33)a |
26.07±11.42c |
| 鳞状细胞癌 |
43 |
|
40.54±15.97b |
| Ⅰ |
13 |
|
25.63±6.54d |
| Ⅱ |
19 |
|
35.85±10.47d |
| Ⅲ |
11 |
|
55.51±14.22d |
a:两者之间P<0.01;b:两两之间P<0.01;c:P<0.01;d:两者之间P<0.01;
责任编辑：姚红祥 |