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提 要 为探讨Fas抗原在颊粘膜鳞癌中的表达分布特点及其相关生物学意义，采用免疫组织化学方法，分别对5例正常颊粘膜、34例颊粘膜鳞癌进行染色，观察Fas抗原表达分布情况。结果发现，颊粘膜上皮生发层中Fas抗原间断性弱表达，其它层细胞广泛表达；Fas抗原表达与颊炽膜鳞癌的分化程度有关（P＜0.01），高分化颊癌中，Fas抗原连续强阳性表达于癌细胞膜，低分化颊癌则呈间断性表达。由此提示，Fas抗原不仅与颊粘膜上皮细胞的自然分化成熟衰老有关，而且还可能在颊粘膜鳞癌发生发展过程中参与分化与去分化的调节。
材料与方法
1. 临床及病理资料
选取经病理明确诊断为颊粘膜鳞状细胞癌的病例34例，其中，男21例，女13例，年龄范围为21～70岁，平均年龄59.5岁；另选正常颊粘膜标本5例。切取标本立即经10％中性福尔马林液固定，石蜡包埋。34例颊粘膜鳞癌常规HE染色下行病理学分级，鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别占18例、12例、4例。
2. 免疫组化SP法染色
所用试剂购自北京中山公司，免抗人Fas多抗为Sata Cruz公司产品，SPTM试剂盒为美国ZYMED公司产品，主要染色步骤如下：①石蜡切片经二甲苯脱蜡后置梯度酒精中水化；②0.1％胰蛋白酶消化30分钟；③3％H2O2封闭内源性过氧化物酶10分钟；④2％小牛血清白蛋白及山羊血清阻断非特异性背景染色各20分钟；⑤加1：80稀释的Fas-抗，孵育30分钟；⑥加生物素标记的二抗，孵育30分钟；⑦加辣根过氧化物酶标记链霉亲和素液，孵育30分钟；⑧室温下DAB呈色3分钟。
除④之后为轻弃孵育液不作洗涤外，上述各步骤之后均以0.01m PBS洗涤5分钟共3次，滤纸干燥。②～⑦均在37℃条件下进行。实验过程中设PBS替代一抗之阴性对照。
3. 染色结果判定
参考文献〔3〕介绍的方法，整个癌组织中的所有癌细胞均呈现为广泛连续性染色，记为“”；癌组织中的部分癌细胞呈阳性着色，或癌细胞呈间断性阳性表达，记为“＋”；癌组织中的所有癌细胞均为阴性反应，记为“－”。
结 果
1. 正常颊粘膜中Fas抗原表达
通过5例正常颊粘膜免疫组化染色发现，Fas抗原表达于颊粘膜上皮细胞膜，呈特异性棕黄色连续着色（图1）。在颊粘膜上皮的生发层（基底细胞层＋棘细胞层底部）细胞中，Fas抗原呈现为间断性阳性表达，部分细胞为阴性表达，随着棘细胞层细胞向表面移行，Fas表达逐渐增强，细胞膜呈连续性阳性着色，尤以棘层中部表达最强，浅表层细胞虽为连续性阳性染色，但表达强度降低（图2）。
2. 颊粘膜鳞癌中Fas抗原表达
Fas抗原表达于颊粘膜鳞癌细胞膜上，近癌巢中央部分之癌细胞Fas抗原表达相对较弱，而癌巢周围部分之癌细胞Fas抗原表达相对增强并呈连续性阳性着色。经实验的34例颊粘膜鳞癌均呈现为Fas抗原阳性染色，未见阴性反应的病例，并发现Fas抗原表达与颊癌的分化程度有关，在分化好的颊癌组织中Fas抗原广泛连续强阳性表达；在分化差的颊癌组织中Fas抗原表达明显减弱，部分癌细胞则呈间断性阳性着色（图3，4）。本组4例颊粘膜鳞癌Ⅲ级均为“＋”，而12例颊癌Ⅱ级病例中5例为“”，7例为“＋”（为便于统计学处理，将Ⅱ、Ⅲ级病列合并分析），18例Ⅰ级颊癌中有16例染色结果记为“”，经卡方检验P＜0.01，Fas抗原表达与颊粘膜鳞癌病理学分级有关（表1）。
表1 颊粘膜鳞癌Fas抗原表达与病理学分级
| 组 别 |
Fas抗原表达 |
合 计 |
 |
＋ |
| Ⅰ级 |
16 |
2 |
18 |
| Ⅱ～Ⅲ级 |
5 |
11 |
16 |
| 合 计 |
21 |
13 |
34 |
注：经四格表x2检验P＜0.01。
图1 Fas抗原连续表达于颊粘膜上皮细胞膜（免疫组化×1000）
图2 Fas抗原在正常颊粘膜上皮中的表达分布（免疫组化×200）
图3 Fas抗原在高分化颊粘膜鳞癌（Ⅰ级）中的表达分布（免疫组化×400）
责任编辑：姚红祥 |