摘要　目的：本研究旨在对口腔颌面部良性肿瘤和癌症患者淋巴细胞亚群进行初步研究，特别是患者的B淋巴细胞和NK细胞。方法：运用双色萤光单克隆抗体标记外周血免疫细胞后，流式细胞仪分析细胞亚群的量和百分比。受试者分为以下三组：实验组Ⅰ-良性肿瘤患者20名；实验组Ⅱ-口腔癌患者20名；对照组-健康成人15名。结果：良性肿瘤和口腔癌患者的CD19+(B淋巴细胞)细胞量及相对百分比分别是698±291，(13.95±5.83)%和649±423，(12.59±8.44)%，均低于正常组的935±363和(18.62±8.1)%(P<0.05)；口腔癌患者的CD16+，CD56+(NK细胞)细胞总数和百分率是721±325和(13.61±6.58)%，明显低于健康组的925±316和(18.54±8.1)%(P<0.05)。结论：口腔颌面部良性肿瘤和口腔癌患者的B淋巴细胞量明显减少，导致了体液免疫功能的下降；同时NK细胞量的减少，是恶性肿瘤患者免疫系统的特征之一。
关键词　流式细胞仪　淋巴细胞亚群　NK细胞　B淋巴细胞　口腔癌

　　口腔癌占全身恶性肿瘤的9.97%左右。机体的抗癌免疫作用是依靠机体的免疫监视作用来完成的，而细胞免疫被认为是起主要作用的。有学者发现口腔癌患者的细胞免疫功能下降，主要表现在CD3、CD4/CD8下降，而CD8升高，经过手术、化疗和放疗后，其细胞免疫功能有所提高［1］，对B淋巴细胞和自然杀伤细胞(Natural Killer cells, NK)的研究报道不多。比如，NK细胞的主要功能是杀伤感染了病DR 体的自身细胞和肿瘤细胞，而最近的研究表明，NK细胞无需预先活化或免疫便能发挥作用，它是天然免疫的重要组成部分［2，3］。
　　本研究旨在运用流式细胞术对口腔颌部良性肿瘤和癌瘤患者的外周血免疫细胞进行初步观察，特别是B淋巴细胞和NK细胞，为进一步探索其免疫功能的变化提供基础。

材料与方法

　　一、研究对象和分组
　　实验组Ⅰ：良性肿瘤患者20例，男12例，女8例，平均年龄：51.5±12.1岁。
　　实验组Ⅱ：口腔癌患者20例，其中牙龈癌8例；舌癌5例，颊癌和口底癌3例，腭癌4例。男13例，女7例，平均年龄：57.9±10.7岁。其中T1、T2期患者9例；T3、T4期患者11例。
　　对照组：健康成人15例，男8例，女7例，平均年龄：45.5±12.3岁。
　　三组间的平均年龄无显著性差异(P>0.05)。
　　二、单克隆抗体及试剂
　　本研究使用的双色荧光抗体均是FITC(异硫氰酸荧光素)和PE(藻红蛋白)标记的鼠抗人的单克隆抗体，由美国库尔特公司所属的法国免疫技术公司提供(IMMUNOTECH， A COULTER COMPANY， Marseille. France)。包括:CD2/CD19;CD3/CD16,CD56;CD4/CD8;lgGM1/IgGM1以及光路-流路校准液(FLOW-CHECK Fluorospheres)和红细胞溶血素(Optilyse Solution)。
　　三、方法
　　所有参试对象均安排在实验当天上午7：30分抽取静脉血4ml,肝素防凝。
　　1.100μl静脉血9+20μl双色荧光标记(鼠抗人)单抗室温37℃孵卵15min。
　　2.溶血素(Optilyse Solution)溶解红细胞。
　　3.PBS (PH7.2)洗涤一次，离心后，将细胞悬浮于PBS中(细胞浓度>1×109/L)。
　　4.流式细胞仪分析:全部数据用流式细胞仪(COULTER EPICS XL, COULTER CO. USA)和软件SYSTEMTMⅡ SOFTWARE获取和分析。步骤如下：首先进行光路-流路校准(FLOW-CHECK)，所有荧光信号的变异系数(CV)均小于2%。荧光Ⅰ为FITC，荧光Ⅱ为PE，滤光片分别为525nm和575nm。然后依次进行阴性对照及PMT电压校准,颜色补偿,淋巴细胞参数测定。

结　果

　　CD2/CD19　CD2和CD19分别代表受检者外周血T、B淋巴细胞的总数。口腔颌面部良性肿瘤和口腔癌患者的CD19(B淋巴细胞)的总数、相对百分比分别是698±291，(13.95±5.83)%和649±423，(12.59±8.44)%，均比正常组的935±363和(18.62±8.1)%低(图1a,表1，2)(P<0.05)。虽然口腔癌患者的CD2(T淋巴细胞)总数略高于正常组，无显著性意义(P>0.05),但是，良性肿瘤组CD2总数明显高于正常组(391±304>3567±409,P<0.05);CD2/CD19(T/B)比例，口腔癌组和良性肿瘤组要明显高于正常组(8.6±6.03，6.74±3.47，4.64±2.5，P<0.05)。

责任编辑：姚红祥