【摘要】　目的　研究C-myc癌基因与Rb抗癌基因在口 腔癌的发生及癌前病变恶变过程中的意义。方法　采用流式免疫荧光 技术对40例口腔鳞状细胞癌，10例口腔白斑和14例口腔扁平苔藓中C-myc和Rb基因蛋白的表 达量进行定量研究。结果　C-myc癌基因在口腔癌、白斑、扁平苔藓 中表达的阳性率分别为65%、30%和21%。在C-myc癌基因的平均表达量中，口腔癌明显高于白 斑和扁平苔藓，差异均有显著性(P＜0.05和P＜0.005)。Rb抗癌基因在口 腔癌、白斑、扁平苔藓中表达的阳性率分别为30%、0和7%。其中口腔癌，白斑，扁平苔藓中 的平均表达量均低于正常口腔粘膜，但差异无显著性(P＞0.05)。口腔癌不同组织 学类型之间Rb蛋白的阳性检出率无明显差异(P＞0.05)。结论　①C-myc癌基因在口腔癌前病变发展为口腔癌过程中具有重要意义。②Rb基因的表达与口 腔癌组织学分级之间无明显关系。③Rb基因表达失活可能成为口腔癌前病变癌变的一种潜在 危险。
　　【关键词】　C-myc基因　　Rb基因　　口腔　　癌　　癌前病 变

　　C-myc癌基因是一种细胞癌基因，在口腔鳞状细胞癌的发生中受到 普遍关注。Rb抗癌基因是人类发现的第一个肿瘤抑制基因，在口腔癌中常出现突变、缺失和 表达异常［1，2］。本研究采用流式细胞免疫荧光方法，观察口腔癌前病变转变为口 腔癌过程中的C-myc癌基因与Rb抗癌基因的变化，以揭示口腔癌前病变恶变的机理。

材料和方法

　　1.标本：从存档资料中挑选出口腔鳞状细胞癌40例(其中高分化19例，中分化5 例，低分化16例)，口腔白斑10例，口腔扁平苔藓14例，正常口腔粘膜3例。
　　2.抗体：鼠抗人C-myc(Ab-1)单克隆抗体为美国On cogene Science Inc，产品。兔抗人 (C-15)多克隆抗体由美国Santa Cruz Biotechnology Inc.公司出品。羊抗鼠或羊抗兔FITC- IgG 二抗由美国Dako公司出品。
　　3.流式免疫荧光染色［3］：①每例蜡块切取40μm厚的组织切片，经二甲苯脱蜡后， 梯度酒精下行入水，用网搓方法制备成单细胞样品。②抗体标记采用间接免疫荧光染色方法 。将1×109/L细胞悬液用PBS离心洗涤2次后，弃上清液，各取0.1ml分别加入1：100 稀释的鼠抗人C-myc或兔抗人Rb抗体100μl，37℃恒温水浴中孵育30min，PBS洗2次后，各加 入1：200稀释的羊抗鼠或羊抗兔FITC-IgG，37℃水浴温育30min，PBS洗涤后离心弃上清液。 各加入1.0mlPBS液，经400目滤网过滤成单细胞，上机分析。③免疫荧光染色后，将单 细胞样品涂片在荧光显微镜下观察，C-myc和Rb阳性细胞均发出绿色荧光，C-myc阳性部位主 要在胞浆，而Rb阳性部位位于细胞核。④免疫荧光检测同时设阳性对照和阴性对照。
　　4.流式细胞检测方法：采用细胞仪FACS-420型流式细胞仪(美国BD公司产品)，激发光源为2W 氩离子激光器，激发波长为488nm，输出功率为300mW。采用FITC荧光染料，用同一个激发波 长的光处理样品。FITC发出的绿色荧光，以520nm的带通滤片用于荧光检测。测量数据及图 形同时输入HP-300 Consort 30计算机，用Single histogram statistics软件进行资料处理 。
　　5.测量资料的分析方法：C-myc基因与Rb基因表达的定量分析方法，采用荧光指数(fluoresc ence index,FI)表示C-myc和Rb基因蛋白表达相对含量。并以FI＞1.0为表达阳性， FI≤1.0为表达阴性。
　　6.统计学分析：所有资料的统计学处理采用t检验和χ2检验。

结　　果

　　一、C-myc癌基因的表达(表1，图1-3)
　　40例口腔鳞状细胞癌中阳性26例(65%)，阴性14例(35%)，其平均表达量(FI值)高于正常口腔 粘膜、口腔白斑和口腔扁平苔藓，并与口腔白斑和扁平苔藓之间差异有显著性(P＜0. 05)和(P＜0.005)。10例口腔白斑中阳性3例(30%)，阴性7例(70%)，其平均表达 量与正常口腔粘膜之间差异无显著性(P＞0.05)，但与口腔鳞状细胞癌之间差异有 显著性(P＜0.005)。14例口腔扁平苔藓中阳性3例(21%)，阴性11例(79%)，其平均 表达量与正常口腔粘膜之间差异无显著性(P＞0.05)，与口腔鳞状细胞癌之间差异 有显著性(P＜0.05)

责任编辑：姚红祥