[摘要]  目的  探讨人端粒酶逆转录酶(hnlnan　telomerase　reverse　transcriptase，hTERT)mRNA在口腔癌前病变及鳞癌中的表达。方法  应用mRNA原位杂交法对口腔鳞形细胞癌(oral sequamous cell carcinomas，SCC)22例，上皮异常增生20例，上皮单纯增生4例及正常口腔黏膜4例，进行了hTERT mRNA的检测。结果  正常口腔黏膜及上皮单纯增生组中hTERT mRNA表达较弱，阳性细胞主要位于基底层及棘细胞深层，阳性表达率为12．5％(1／8)。上皮异常增生组中hTERT mRNA的阳性细胞表达范围由基底层向多层上皮细胞扩展，表达率为45％(9／20)。SCC组中TERT mRNA阳性表达最强，表达率为81．18％(18／22)。结论  hTERT的活化在口腔黏膜癌前病变癌变过程中起作用，随着细胞异型性的增加，hTERT mRNA阳性率及信号强度均增高。
[关键词]  癌前病变；端粒酶逆转录酶；原位杂交
[中图分类号]  R730．43    [文献标识码]  A    [文章编号]  1003—9872(2003)03—0137—03
    端粒酶(telomerase)通过合成真核生物末端端粒重复序列，延长端粒，从而使细胞获得无限增殖能力。研究表明，正常体细胞几乎无端粒酶表达，而绝大多数永生化细胞、恶性肿瘤细胞及少数增殖活跃细胞含有端粒酶。端粒酶被认为是迄今为止最具有人体肿瘤特异性和敏感性的分子标志物「1」。为探讨口腔黏膜癌前病变癌变过程与端粒酶活性表达的关系，我们采用原位杂交方法，对口腔黏膜扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)、白斑(1eukoplakia，LK)、口腔鳞形细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)进行人端粒酶逆转录酶(human telomerase everse tran-scriptase，hTERT)基因表达的检测，评价端粒酶基因检测价值，为早期诊断癌前病变的恶化危险性提供依据。
1 材料与方法
1．1  材料
  标本取自南京医科大学附属口腔医院病理科1998—2002年存档蜡块共50例，其中正常口腔黏膜4例，OLP及LK无异常增生4例，LK伴异常增生15
例，OLP伴异常增生5例，SCC 22例，均按1978年WHO制定的口腔黏膜癌前病变标准为根据。组织切片由两位有经验的临床病理学专家阅片作出病理诊断，肿瘤标本均为初发肿瘤原发病损，未经过放化疗。所有标本均用10％中性甲醛固定，常规石蜡包埋，涂3—氨丙基三乙氧硅烷(APES)防脱片剂，切片4 um厚，含0．1％焦磷酸二乙酯(DEPC)双蒸水展片。
1．2  试剂
    探针、试剂盒购自北京大学医学部病理系，地高辛精标记的hTERT—cRNA。
1．3  方法
    原位杂交：常规石蜡切片，脱蜡，水化后用0．1ml/L盐酸处理，100mg/L蛋白酶K消化，4％多聚甲醛后固定，90％乙醇脱水，每片组织滴20 ul杂交液，封口膜封片，42℃20 h，杂交结束后，含50％甲酰胺的2XSSC 37℃30 min X l，2 X SSC 42℃洗15minX3，0．1XSSC 37℃洗15min X l，Buffer I(100mmol/LTris-C1 pH7．5，150mmol／L NaCl)洗5 s X l。马血清(1：100)室温封闭40 min，Anti-Dig-AP(1：500)室温1 h。NBT／BCIP显色30 min终止，明胶封片。阳性对照为口腔鳞癌，常规设立阴性对照。并且在端粒酶的检测中为了防止RNase的污染破坏cRNA探针使结果出现假阴性，所有实验用品及试剂都要经过DEPC水处理，高压灭菌，整个操作过程戴手套。
    结果判定：以细胞质中出现蓝紫色颗粒为阳性着色，计算10个高倍视野(400倍)内阳性细胞的平均百分比。根据口腔黏膜上皮细胞特点及探针的定位特异性，并参考钟鸣等「2」文献资料，将染色结果分为：<10％计为(—)，即阴性；10％-40％计为(+)，即弱阳性；40％-70％计为(++)，即中阳性；≥70％计为(+++)，即强阳性。
1．4统计学处理
    采用SPSS统计软件，进行x2检验。

责任编辑：姚红祥