【摘　要】　目的　研究血管生成抑制剂TNP-470联合顺铂（CDDP）对口腔腺样囊性癌生长及肺转移的抑制作用。方法　分别将建株的口腔腺样囊性癌肺转移细胞株（ACC-M）细胞悬液注射至裸鼠皮下和尾静脉, 建立口腔腺样囊性癌皮下移植瘤及实验性肺转移模型。从移植后的第3周开始,于裸鼠对侧皮下注射TNP-470 30mg/kg，隔日1次, 共7次。CDDP分别在第3周和第4周腹腔给药各1次，剂量为5mg/kg。停药后第2d处死裸鼠。测量肿瘤大小, 称重并计数肺转移结节数。以兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色后，计数皮下瘤块血管密度。结果　与单用TNP-470相比，TNP-470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移的抑制作用更强，但对皮下移植瘤的血管密度影响无明显差异。结论　TNP-470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移有明显的抑制作用。
【关键词】　口腔腺样囊性癌 ; TNP-470; CDDP ; 肿瘤生长; 肺转移

　　 通过抑制肿瘤血管生成，阻止肿瘤生长和转移，是近年来发展起来的新的治疗肿瘤的策略。TNP-470是烟曲霉素的衍生物，体内外具有强烈的抑制肿瘤新生血管内皮细胞增殖和 血管形成的作用，其不良作用小，受到研究者的关注。联合其它治疗措施，效果可能 更好。作者以裸鼠体内口腔腺样囊性癌肺转移株（ACC-M）为模型，探讨TNP-470联合顺铂 （CDDP）对ACC-M 的抗肿瘤和抗转移作用，及其对血管密度的影响。

1　材料和方法
1.1　动物及分组
　　4～5周龄BALB/c-nu-nu裸小鼠，18只。体质量18～20g，全部雄性，SPF级。昼夜12h 交替层流架内、25～28℃下饲养。裸鼠等重，分为3组。第1组为TNP-470注射组，第2组为TNP-470+CDDP注射组，第3组为生理盐水注射对照组。
1.2　药物及用法
　　TNP-470由日本Takeda 化学工业有限公司的Hitoshi Ikeda博士惠赠，溶于1%酒精中，使用前与5%的阿拉伯胶配制。CDDP 由齐鲁制药厂生产［批号91052，齐鲁卫药准字（85）861-62］。注射肿瘤细胞后第3周开始给药，TNP-470剂量为30mg/kg，隔日1次，共7次。注入右侧皮下，注射点与左侧肿瘤相距大于2cm，以免TNP-470直接扩散至瘤周。CDDP 5mg/kg分别于第3周和第4周共分两次注入腹腔。
1. 3　 口腔腺样囊性癌生长及肺转移模型
　　ACC-M细胞悬液含5×105个细胞分别注射于裸鼠左侧背部皮下和尾静脉。皮下肿瘤于第8d出现，2周时迅速生长，此时体积已达4mm×4mm×4mm大小。
1． 4　皮下肿瘤生长治疗实验
　　皮下肿瘤体积隔日测量1次。
　　肿瘤体积（V）=ab2π/6,（其中a为肿瘤的最 大径，b为肿瘤的最小径）。

　　实验结束后第2d处死裸鼠，分别解剖皮下包块，称重，送检。裸鼠荷瘤时间为4周，治疗时间为荷瘤后2周。
1． 5　对肺转移的抑制作用
　　尾静脉注射后，给药方式同前。裸鼠处死后，解剖肺，称重, 肺转移灶计数为光镜下经肺门最大纵切面的结节数。
1．6　染色
　　皮下标本分别行HE染色和兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化分析。参照Weidnei等［1］报道的方法，在400倍镜下计数血管密度。
1．7　统计学处理
　　采用配对t检验和χ2检验进行分析。

2　结果
2.1　TNP-470对皮下肿瘤生长的抑制作用
　　皮下肿瘤均有生长，呈球形突起，表面有结节。处死后见包块周围有包膜，能完整分离瘤块，切面呈鱼肉状。治疗组与对照组皮下肿瘤大小和重量有明显差异（P＜0.01），第1、2组抑瘤率分别为43.16%和58.87%，两组间有显著差异（P＜0.05）。
2.2　TNP-470及联合CDDP对肺转移的抑制作用
　　第1、2组肺结节数和肺重量较第3组明显减少，第2组在肺重量及肺结节数上较第1组亦有显著差异（P＜0.05）。
2.3　TNP-470对血管生成的抑制作用
　　第1、2组的血管密度较第3组减少，有显著性差异。而第1、2组间无显著差异（P＞0.05 ）。
　　实验结果见附表。

附表　TNP-470联合CDDP对ACC-M的肿瘤抑制和抗肺转移的作用(±s)

责任编辑：姚红祥