摘要　目的：建立免疫功能正常小鼠肾囊膜下移植舌癌模型。材料和方法：利用SRCA技术，建立移植舌癌模型，观察移植前后瘤体大小的变化，并对移植瘤进行病理切片观察。结果：舌癌移植后第6天瘤体增长率为87.8%(7/8)(P＜0.05)，病理切片证实其为高分化性鳞癌。结论：小鼠肾囊膜下移植舌癌模型的建立具有可行性，它可为舌癌的基础与临床研究提供一个经济、快速、高效的动物模型。
关键词　小鼠　肾囊膜下　舌癌模型

　　舌癌是常见的口腔恶性肿瘤，国内学者报道其发病率已居口腔恶性肿瘤的第一位［1］。因此，舌癌的防治在口腔肿瘤防治的研究中占相当重要的地位。
　　利用动物复制舌癌模型，是研究舌癌防治的重要手段，但目前常见的以裸鼠为复制对象的舌癌皮下、原位等模型［2］，存在饲养条件要求高、耗时长、花费大等不足。1978年Bogden 首先建立了人体肿瘤块裸鼠肾囊膜下移植法(Subrenal Capsule Assay, SRCA), 随后又成功地把这一方法应用于免疫功能健全的小鼠［3］。但国内外尚未见小鼠肾囊膜下移植舌癌模型建立的报道。
　　本研究旨在建立一种全新的舌癌模型，为舌癌的防治提供一个简便、经济、快速、实用的动物模型。　　

材料和方法
　　1. 试剂：RPMI1640培养基(GIBCO产品，USA)。
　　2. 实验动物：BALB/c纯系小鼠，雌性6只，8周龄，20～21g；雄性2只，8周龄，22g。湖北省医学科学院实验动物中心提供。小鼠置于通风、干燥环境，清洁饮水，纯系鼠料喂养。
　　3. 仪器：游标卡尺(精确度0.02mm)，广西桂林量具刃具厂。
　　4. 模型建立方法：
　　(1) 将手术切除之舌癌标本漂洗后，于无菌操作台上剪成直径约1.5mm大小之瘤块，置于RPMI1640培养液中，4℃冰箱存放备用。
　　(2) 小鼠腹腔注射2%戊巴比妥纳麻醉。
　　(3) 小鼠取俯卧位，常规消毒后从一侧肾脏部位平行脊椎切开一约7mm的切口，打开腹腔托出肾脏。
　　(4) 以血管钳或眼科镊轻提肾囊膜，以16号套管针将舌癌组织小块接种于肾囊膜下。
　　(5) 以游标卡尺测量瘤体长径(L)、宽径(W)，计算瘤体大小(TS)：TS=(L+W)/2。
　　(6) 还纳肾脏于腹腔，分层缝合腹膜、肌层及皮肤层。
　　(7) 术后常规肌注青霉素3天。
　　(8) 术后第6天处死小鼠，打开腹腔，以游标卡尺测量瘤体长径与宽径，计算瘤体大小(TS)：TS=(L+W)/2。
 
　　(9) 计算瘤体前后大小之差△TS:△TS=TS末-TS初。
　　5. 对瘤体前后大小的变化结果用t检验进行统计学处理。
　　6. 小鼠一般情况的观察：包括饮食、活动情况、被毛、体重等。
　　7. 移植舌癌的组织病理学观察：处死小鼠后，将荷瘤肾固定于4%多聚甲醛中性固定液中，梯度酒精脱水、二甲苯透明，常规浸蜡、包埋、切片、HE染色，光镜下观察。　　
结　果
　　移植后第六天处死小鼠后测瘤体大小(TS)，发现除一例略缩小外，其余均呈不同程度增大，增长率为87.8%(7/8)(见附表)。统计学处理表明，移植前后瘤体大小的增加有显著性(P＜0.05)。
　　

附表　移植舌癌瘤体大小变化(△TS) 

BALB/C 小鼠	△TS(mm)
	正增长	负增长
雌性(6只)	0.7，0.37，0.03，0.89，0.27	-0.02
雄性(2只)	0.1，0.84

t检验，P＜0.05

　　
图1　瘤体中央有角化囊形成，瘤体边缘与肾皮质间有较多淋巴细胞浸润。
HE染色　　　　×25×3

　　
图2　癌细胞局限于肾囊膜下，排列呈巢状及不规则条索状，可见核分裂相。
HE染色　　　　×100×3

　　荷瘤肾的组织病理学切片光镜下可见瘤体中央有角化囊形成，癌细胞局限于肾囊膜下，排列呈巢状及不规则条索状，癌细胞呈多边形或不规则形，胞核大、深染，可见核分裂相，瘤体边缘与肾皮质间有较多淋巴细胞浸润(图1、图2)。
　　术后至处死前，小鼠活动良好，饮食正常，被毛无异常，体重无减轻。　　

讨　论
　　自Bogden首先建立人体肿瘤块裸鼠肾囊膜下移植法(SRCA)， 随后又成功地把这一方法应用于免疫功能健全的小鼠以来，学者们对该方法及其应用进行了广泛而深入的研究。

责任编辑：姚红祥