[摘要]  目的  探讨血管内皮生长因子(vascular endothel ialgrowth factor，VEGF)和口腔鳞癌侵袭转移的关系。方法  采用蛋白酶谱分析法测量不同浓度VEGF作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后基质金属蛋白酶—2(matrix metal—loproteinase-2，MMP-2)和MMP-9的活性，同时用Boyden Chamber观察VEGF诱导口腔鳞癌TSCCa细胞转移的作用。结果  不同浓度的VEGF(1、5、10 ng／ml)作用于GNM细胞2h后，MMP-2和MMP-9的活性与对照组相比，差异无显著性(P>0．05)；而不同浓度的VEGF作用于TSCCa细胞2h后，MMP-2和MMP-9的活性与对照组相比，差异有显著性(P<0．05或0．01)，MMP-2和MMP-9的活性与VECF有剂量依赖关系，用VEGF l、5、10 ng／ml培养口腔鳞癌TSCCa细胞系2h，Boyden Chamber小室下室浸润的口腔鳞癌细胞数分别为(6．67±1．78)x10 4／ml、(17．17±2．38)x10 4／ml、(22．33±2．54)x10 4／ml，分别高于对照组(2．48±1．02)x10 4／ml(P<0．05或0．01)。结论  VEGF可促进口腔鳞癌细胞侵袭转移。
[关键词]  口腔鳞癌；肿瘤转移；血管内皮生长因子；基质金属蛋白酶类
    研究发现，血管内皮生长因子(vascular endothe—lial growth factor，VECF)是重要的血管形成因子，可诱导肿瘤血管形成，在肿瘤组织中有较高表达，与肿瘤浸润和转移过程密切相关「1,2」。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的表达和活性在口腔鳞癌侵袭转移中起重要作用「3」；MMPs的表达及活性可受多种因素的影响，VEGF可能是其中的因素之一。我们拟通过检测外源性VECF对体外培养的人口腔鳞癌及其转移癌细胞系中MMP-2、MMP—9活性的影响，探讨VEGF与口腔鳞癌侵袭转移的关系，为研究口腔鳞癌侵袭转移的分子机制奠定基础。
1  材料和方法
1．1  材料
1．1．1  主要试剂和仪器  重组VECF购自美国Sig-ma公司，用无血清RPML- 1640培养液配置成10 ng／ul，置于—20℃保存待用；RPMI-1640、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、牛血清白蛋白(BSA)购自Sigma公司；Boy-den Chamber由江苏海门麒麟医用仪器厂提供；Beckman公司液体闪烁仪，MPIAS-500多媒体图像分析仪；Beckman超低温冷冻干燥机，HV-3000多用电泳仪，垂直板凝胶电泳槽。
1．2  方法
1．2．1  细胞培养  人口腔鳞状细胞癌细胞系TSC-Ca和颈淋巴转移癌细胞系GNM由湖北医科大学口腔医学院金辉喜博士建立「4」，武汉大学典藏中心保存；在含10％小牛血清的100 U／ml青、链霉素的RPMl l640培养液内，5％C02、37℃培养箱内常规传代培养。
1．2．2  标本收集及处理  待细胞生长至对数期时，更换为无血清培养基(不含酚红)继续培养12h后，加入不同浓度的VEGF，2h后按文献「5」
的方法收集培养液，冷冻抽干后标本置人—20℃冰箱保存备用，每组至少3个平行样本。临用前用双蒸水溶解，取5 ul溶解液和5 ul上样缓冲液混合后采用蛋白酶谱分析，于10％十二烷基磺酸钠—聚丙烯烍胺北胶(SDS-PAGE)电泳，清洗后于孵育液中孵育24 h，0．1％考马斯亮蓝R-250染色，按参考文献「6」的方法分析测量。
1．2．3  VEGF诱导口腔鳞癌细胞系侵袭实验  用具有上下室的Boyden　chamber分析人口腔鳞癌细胞系TSCCa转移能力的改变「6」。设BSA 10 mg／ml对照组、VEGFl、5、10ng／ml 3个不同浓度组，每组Boyden chamber下室盛满混有VEGF的10％小牛血清RPMI—1640培养液200 ul。将硝酸纤维素膜放置于下室表面，套紧上室，使硝酸纤维素膜将上下室分开。在上室中加入1 ml的TSCCa细胞。置于37℃、5％CO2温育箱中培养120 min，培养结束后，计算下室浸润的人口腔鳞癌细胞数(4大格细胞数／4X10 4)，细胞数越多，说明口腔鳞癌细胞转移能力越强。

责任编辑：姚红祥