〔摘要〕　目的：了解层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原在口腔粘膜鳞状细胞癌中的表达情况。方法：采用免疫组化之SPTM法对30例口腔鳞状细胞癌，10例正常口腔粘膜染色。结果：正常口腔粘膜基底膜LN和Ⅳ型胶原染色密度高，呈连续线状。鳞状细胞癌LN和Ⅳ胶原的染色密度。基底膜的连续性与肿瘤的分化程度呈负相关。结论：LN和Ⅳ型胶原的表达异常与肿瘤分化、浸润和转移有密切关系，可作为判断肿瘤预后的一项指标。
关键词　层粘连蛋白；Ⅳ型胶原；基底膜；鳞状细胞癌

　　层粘连蛋白(laminin，LN)和Ⅳ型胶原(collagen Ⅳ)是基底膜(basement membrane,BM)的主要成分，它们对于细胞的生长、分化及运动具有调节作用，与多种疾病有关。目前发现LN、Ⅳ型胶原与许多皮肤、粘膜疾病、肿瘤的发生及浸润和转移均有密切关系。
　　口腔粘膜鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，对人类生命健康危害极大。随着免疫学的飞速发展，鳞癌组织中基底膜蛋白成分的变化受到众多学者的重视。本文采用免疫组化技术对不同分化程度的口腔粘膜鳞状细胞癌基底膜中LN、Ⅳ型胶原进行检测，观察其表达情况。

1　材料和方法

1.1材料来源　选择我院1995～1997年间资料完整的存档蜡块，鳞状细胞癌30例，组织分化程度为高度分化(G1)10例，中度分化(G2)9例和低度分化(G3)11例。另以10例正常粘膜组织石蜡标本为对照组。
1.2主要试剂　LN多克隆抗体(1∶30)，Ⅳ型胶原单克隆抗体(1∶50)，生物素标记二抗(1∶100)，SPTM试剂盒均由北京中山生物技术有限公司提供。
1.3染色方法　主要步骤如下：①切片脱蜡至水；②3%(体积分数)过氧化氢液去除内源性过氧化物酶；③4g/L%胃蛋白酶消化，37℃，4min；④滴加正常羊血清，37℃，20min；⑤加第一抗体(LN，Ⅳ型胶原抗体)4℃过夜；⑥滴加第二抗体(羊抗兔IgG，羊抗鼠IgG)37℃，30min；⑦滴加三抗(过氧化酶标记的链霉卵白素)37℃，30min；⑧0.5g/LDAB显色；⑨苏木素复染，脱水、透明、封片。①～③和⑤～⑥步后均经PBS洗3次，每次5min。用已知阳性片作对照，以PBS代替第一抗体作阴性对照。
1.4评定标准　以基底膜染色的密度和基底膜的连续性为基础来评定。染色密度以DAB显色(棕色)的深度为基础分为：缺失(-)，染色密度低(+)、染色密度高(++)。基底膜连续性分为：连续(Ⅰ)，轻度不连续(少数断裂)(Ⅱ)，重度不连续(多处基底膜断裂(Ⅲ)，基底膜缺失(Ⅳ)。
1.5统计学处理　采用秩和检验法求Hc值，推断P值范围。

2　结　果

　　正常口腔粘膜基底膜LN和Ⅳ型胶原染色密度高，呈连续线状(图1)；高分化鳞状细胞癌可见癌巢周围基底膜染色密度减弱，且基底膜变薄，部分基底膜断裂(图2)；中度分化鳞状细胞癌基底膜染色密度较高分化鳞癌低，多处基底膜断裂；低分化鳞状细胞癌则显示大部分病损基底膜严重破坏，甚至基底膜缺失。2种蛋白的染色密度与肿瘤的分化程度呈负相关；基底膜的破坏程度与肿瘤的分化程度呈平行增加趋势。

图1正常口腔粘膜Ⅲ型胶原　图2高分化鳞癌Ⅳ型胶原基
基底膜染色10×3.3　　　　　　底膜染色10×3.3　　　

　　正常粘膜上皮与不同分化程度鳞癌组织的基底膜LN和Ⅳ型胶原染色密度及基底膜连续性见表1、2，经秩和检验P?.05，有差异。

表1　LN、Ⅳ型胶原基底膜染色密度

染色 强度	LN				Ⅳ型胶原
	正常	G1	G2	G3	正常	G1	G2	G3
++	10	3	2	—	10	2	2	—
+	—	7	6	11	—	8	5	5
-	—	—	1	—	—	—	2	6

表2　LN、Ⅳ型胶原基底膜的连续性

责任编辑：姚红祥