〔摘要〕　目的：动态研究金黄地鼠舌癌发生、发展过程中血管生成的变化规律。方法：采用组织学定量方法，结果：舌部癌前阶段即有血管生成现象，从癌前病变、原位癌、浸润癌发展的不同时期，血管生成现象持续存在，并随着癌细胞的增殖、浸润更为明显，血管增生主要由周边向中心呈向心性增生，肿瘤发展至一定阶段肿瘤中心出现血管生长的停滞。结论：血管生成是舌癌生长、发展的重要先决条件。
关键词　仓鼠；舌肿瘤；新血管生成；定量分析

　　早在1971年，Folkman就提出了肿瘤生长具有血管生成依赖性这一概念。以后陆续有实验研究表明，肿瘤连续性生长必需有血管形成，当实体瘤生长到直径为2 mm时，如继续生长，就需要血管供应的保障。瘤细胞可能产生一种肿瘤血管生长因子(TAF)，促进血管内皮细胞的分裂出现新生毛细血管，进而沟通血流，进入肿瘤组织内，保证瘤组织的氧和营养，同时，新生血管为肿瘤代谢产物的排除提供了途径。因而，血管生成是肿瘤局部生物学行为的基础。然而，关于血管形成是否为肿瘤侵袭的主要先决条件尚有争议。正常舌组织发生癌变转化期间以及癌变后肿瘤生长的不同时期的血管增生情况和定量研究方面尚缺乏资料。
　　本实验通过化学诱癌剂诱发金黄地鼠舌癌动物模型，采用组织学定量方法，动态研究肿瘤发生、发展过程中血管生成的变化规律，为舌癌血管生成和局部生物学行为之间的关系及舌癌的治疗提供基础实验依据。

1　材料与方法

1.1　实验动物与分组　6～8周龄叙利亚金黄地鼠48只，随机分为6组，每组8只。1组，空白对照组，第21周末处死。2组用5 g/LDMBA丙酮溶液涂布右舌侧缘中后1/3交界处+局部拔髓针刺激，于第9周末处死。3组、4组、5组、6组处理因素同2组， 分别于第12周末、15周末、18周末、21周末处死。
1.2　实验方法
1.2.1　墨汁血管灌注组织切片　用10 g/L戊巴比妥钠按50 mg/kg体重腹腔注射将动物麻醉后，仰卧固定于手术板上，打开胸腔，显露心脏，经左心室插入导管至升主动脉，丝线结扎固定，再结扎降主动脉，切开右心房，用35～37℃生理盐水自左心室导管灌注冲洗头颈部血管，待右心房流出液清亮为止，然后用冲洗液冲洗。冲洗液中含罂粟碱0.12 g/L(用于松驰血管平滑肌)，肝素25 000 IU/L(用于抗凝血)，低分子右旋糖苷15 mg/L(维持血管内胶体渗透压以免组织水肿)。灌注30 g/L明胶墨汁溶液(将明胶按上述比加入中华墨汁中，加温至36～37℃，搅拌混匀备用)，灌注压控制在12～15 kPa，至舌体、口腔粘膜、牙龈及头颈部皮肤呈黑色，不致引起毛细血管破裂为度。取肿瘤及周围组织块，体积分数为10%甲醛固定，石蜡包埋，作与粘膜表面垂直切片，厚5 μm，HE染色，光学显微镜下观察。
1.2.2　血管生成的组织学定量研究　将HE染色切片，置于四川联合大学图形图象分析研究所研制的MIAS-2000显微图象分析仪下进行测量。高倍镜下(10×40)面积为0.502 4 mm2，分别计数肿瘤中心区和边缘区每个视野内的血管密度(血管数目/mm2)及血管面积密度(血管内腔面积/肿瘤组织面积)。
　　每个标本肿瘤中心区和周边区依顺序分别测量10个视野，取平均数，得出各自的血管密度值和血管面积密度值。正常空白对照组及自身对照舌粘膜标本不分区域进行测量，方法相同，得出正常参考值。

2　结　果

　　显微图象分析仪血管密度(条/mm2)、血管面积密度(%)计量结果如表1所示。图1～3显示了墨汁微血管灌注情况。

图1　正常舌粘膜墨汁灌注，粘膜下层结缔组织中有散在血管分布，血管形态较正常。HE×20

图2　15周组，增生的基底细胞周围粘膜下结缔组织中血管增生明显，密度增大。HE×20

图3　21周组，癌巢周围血管增生更加强烈，血管密度更大，血管分布混乱，囊腔血管多见。

表1　各组动物粘膜下(或肿瘤内)血管密度及血管面积密度值　(±s)

责任编辑：姚红祥