摘要　目的：探讨绞股蓝皂甙(gypenosides, GP)及平阳霉素(PYM)对口腔鳞癌颈淋巴结转移癌GNM细胞的体外抑制作用及作用机制。方法：采用MTT法及流式细胞仪进行分析。结果：GP与PYM对GNM细胞均有抑制作用,抑制率与药物浓度呈正相关,二者联用,抑制率增强。GP主要作用于细胞的“S”期。结论：GP与PYM对GNM细胞具有抑制作用, GP对细胞的损伤是通过干扰细胞周期实现的,GP与PYM联用抑制作用增强在于二者作用的细胞周期不同。提示用药时可根据二者各时相时间分开应用。GP具有临床应用价值。
　　关键词　绞股蓝皂甙　细胞毒　细胞周期

　　化疗是预防和治疗恶性肿瘤局部复发无法手术或放疗不敏感或有远处转移病例的主要手段。但是化疗药物在抑制或杀伤癌细胞的同时，对机体的正常细胞尤其是造血细胞及免疫活性细胞亦有不同程度的损伤。如何降低药物毒性一直是学者们关注的重点。有研究表明,部分中草药对某些肿瘤细胞具有抑制或杀灭作用,而对正常细胞无影响,且能协同手术、放疗或化疗起到提高和巩固疗效的作用。
　　绞股蓝系葫芦科绞股蓝属植物，主要有效成分为绞股蓝皂甙(gypenosides, GP)。实验证明，GP可抑制多种肿瘤细胞的增殖［1］。为了更进一步了解其和化疗药物联用的效果及作用机制,本实验采用MTT法及流式细胞仪对其抑制口腔转移癌细胞的作用进行了相关研究。

材料与方法
　　1. 细胞　人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌GNM细胞株,由湖医口腔医院中心实验室建立［2］。
　　2. 药物 GP, 含量大于90%,陕西省安康中药厂产品。平阳霉素(PYM),天津市河北制药厂产品,8mg/支。药物使用时用培养液稀释成各种不同浓度。
　　3. MTT法测定［3］
　　取指数生长期的培养于RPMI-1640(含10%小牛血清)培养液中的GNM细胞,制成单细胞悬液,用0.5%台盼蓝检测活细胞率。用血球计数板计数，调整细胞浓度为105/ml。然后将细胞悬液加入96孔培养板,每孔100μl。将培养板置于37℃、含5%CO2的培养箱中培养24h后,各加入100μl五种不同浓度的GP、PYM和GP＋PYM的混合剂。每组每一浓度重复4孔。设不含药物的对照组,培养72h后,每孔加入20μl 0.5%MTT溶液,继续培养4h。然后,吸除孔内液体,每孔加入150μl二甲基亚砜,振荡5d后,用全自动酶标仪(516型,波长为540nm)测定每孔光吸收值(OD),以下式计算出药物对细胞的生长抑制率(IR%)。

　　4. GP对GNM细胞增殖周期的检测
取指数生长期的GNM细胞制成浓度为105/ml的单细胞悬液,接种于25ml培养瓶中,每瓶含培养液5ml,设实验组和对照组。24h后实验组加GP终浓度为200μg/ml。
　　培养72h后用0.25%胰蛋白酶消化制成单细胞悬液,收集于离心管中。800～1000r/min离心5d,用PBS洗涤、离心2次后，用70%冷乙醇固定。上机前用PBS进行离心沉淀去除固定液。采用溴化乙啶一步插入法，DNA定量荧光染色(染液含EB10μg/ml,RNA酶10μg/ml,1%Rritonx-100), 0～4℃染色30d后,用FACS-420型流式细胞仪上机检测,拟合出细胞周期各时相比例。

结　果
　　1. GP对GNM细胞生长的影响
　　从表1看出,不同浓度的GP对GNM细胞生长均有抑制作用,抑制作用随浓度的增加而增加,呈浓度依赖关系。2.2 PYM对GNM细胞生长的影响

表1　不同浓度GP对GNM细胞的生长抑制率(IR%)

对照组		实验组(μg/ml)
		25	50	100	200	600
OD	0.530	0.335	0.266	0.224	0.205	0.166
IR		36.8	49.8	57.8	61.3	68.7

表2　不同浓度PYM对GNM细胞的生长抑制率(IR%)