|
摘要 目的:观察端粒酶催化蛋白基因hTRT在口腔粘膜恶性转化不同阶段中的表达,探讨其与口腔粘膜细胞恶性程度的关系。方法:用原位杂交技术检测82例标本,其中正常口腔粘膜7例、上皮单纯性增生7例、上皮异常增生30例、原位癌8例、口腔粘膜鳞癌30例。结果:正常口腔粘膜、上皮单纯性增生组织中hTRT的mRNA表达较弱,阳性信号仅局限于上皮基底层及副基底层间,阳性率21.4%(3/14);上皮异常增生中hTRT mRNA阳性表达见于多层上皮细胞,并随细胞异形性增高而表达增强,阳性率46.7%(14/30);口腔粘膜鳞癌组织中hTRT的mRNA有较强阳性表达,阳性率81.6%(31/38)。结论:端粒酶hTRT基因的表达与口腔粘膜细胞的恶性程度密切相关,端粒酶的重新激活在口腔鳞癌的形成过程中起了关键性作用。
关键词 端粒酶 hTRT基因 癌前病变 鳞癌
口腔粘膜癌前病变在人群中有较高的发病率,尤其是老年人,对其恶变倾向进行客观的预测将有助于加强对高危患者的有效监控。近年研究结果发现:端粒酶活化是细胞癌变及癌演进过程中普遍而特异的标志。1997年,Cech和Veinberg等分离克隆出了端粒酶的催化蛋白基因,命名为hTRT/hEST2(human telomerase reverse transcriptase/human ever shorter telomere)［1］。迄今为止,hTRT基因编码的端粒酶蛋白亚基成分是与端粒酶活性关系最为密切的核心单位。端粒酶hTRT基因的表达与细胞端粒酶活性一致［2］。研究hTRT基因在口腔癌前不同阶段及鳞癌中的表达,可为早期评估口腔粘膜癌前病变恶变倾向提供客观的指标。
1 材料和方法
1.1 标本
取自上海第二医科大学附属第九人民医院口腔病理科1997～1998年收集的存档蜡块共82例,经重新切片及病理诊断,其中正常粘膜7例、单纯性增生7例、上皮异常增生30例、原位癌8例、鳞癌30例,所有组织均经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,制成4～5 μm厚的切片。
1.2 原位杂交
切片经68℃烘烤2 h,二甲苯、酒精梯度水化,蛋白酶K(100 μg/ml)消化,37℃15 min,4%多聚甲醛固定10 min,PBS缓冲液洗涤5 min 3次,95%乙醇脱水自然风干,每片滴加20 μl经80℃变性的杂交液(北京中山公司提供),加盖封口膜,置于50%甲酰胺2×SSC的湿盒中,于37℃孵育20 h。在50℃的2×SSC中洗涤5 min 3次,PBS冲洗后,滴加ABC过氧化物酶复合物,室温1 h,DAB-H2O2显色,苏木素复染。脱水封固,常规设立阴性、阳性对照。
1.3 结果判定
以细胞浆出现棕色颗粒为标准。染色强度分4个等级。阴性(-):肿瘤细胞或上皮细胞不显色或背景深染色不清晰;弱阳性(+):25%～50%肿瘤细胞显色或上皮细胞仅基底层出现阳性信号;中度阳性():50%～75%肿瘤细胞显色或上皮细胞基底层以上也出现阳性信号;强阳性():大于75%肿瘤细胞显色。所得数据采用χ2检验进行统计学处理。
2 结 果
2.1 正常对照组中hTRT mRNA的表达
以正常粘膜、上皮单纯性增生组织作为对照组,14例标本中11例hTRT mRNA表达阴性,仅有3例在粘膜基底层及副基底层出现较弱的hTRT的mRNA信号(图1),阳性率为21.4%(表1)。
图1 正常组织中hTRT表达 阳性细胞(↑)主要位于基底一副基底-副基底层原位杂交 ×224
表1 hTRT mRNA在口腔粘膜、上皮单纯性增生组织中的表达
| 病理分类 |
n |
hTRTmRNA |
染色强度 |
| + |
% |
- |
+ |
 |
 |
| 正常口腔粘膜 |
7 |
1 |
14.3 |
6 |
1 |
- |
- |
| 上皮单纯性增生 |
7 |
2 |
28.6 |
5 |
2 |
- |
- |
| 合计 |
14 |
3 |
21.4 |
11 |
3 |
- |
- |
2.2 癌前病变中hTRT mRNA的表达
30例标本中14例hTRT mRNA表达阳性,阳性率46.7%(表2)。随着异常增生程度的增加,hTRT的mRNA阳性信号逐渐增强,范围由基底层向多层上皮细胞扩展(图2)。以重度非典型增生阶段hTRT mRNA表达程度最强。
图2 粘膜重度异常增生组织中hTRT表达阳性染色(↑)见于多层上皮细胞原位杂交 ×224
表2 hTRT mRNA在口腔粘膜癌前病变中的表达 |
责任编辑：姚红祥 |