【摘要】　目的　观察端粒长度变化在涎腺肿瘤形成及发展中的作用。方法　采用Southern杂交技术对11例正常涎腺组织，15例良性涎腺肿瘤，18例恶性涎腺肿瘤的端粒长度进行测量。结果　良性及恶性涎腺肿瘤的平均TRF(terminal restriction fragment)明显比正常涎腺的平均TRF短，且有显著性差异。良性与恶性涎腺肿瘤的平均TRF相比，无显著性差异。结论　端粒的异常状态参与涎腺肿瘤的发生。在肿瘤恶性变过程中，端粒长度经历了复杂的变化过程，不是单纯的持继性变短过程。
　　【关键词】涎腺肿瘤　　端粒　　端粒酶

　　端粒是真核细胞线性染色体末端的一种特殊结构，由富含G的简单的重复序列TTAGGG所构成。它维护染色体的稳定性及完整性，防止染色体末端发生降解及端—端融合。端粒酶是一种核酸蛋白质，其功能是合成染色体末端的端粒。补偿因染色体“末端复制问题”［1］而造成的端粒丢失。目前，端粒—端粒酶假说已成为新的肿瘤研究模式，人们发现端粒的长短和稳定性决定了细胞的寿命，并与细胞衰老及癌发生有密切关系［2，3］。已有许多研究发现［4］，在绝大多数肿瘤中有端粒长度明显缩短的现象。我们利用分子生物学技术，观察端粒长度在正常涎腺及涎腺肿瘤中的变化情况，以探索端粒长度在涎腺肿瘤发生、发展中的变化规律。

材料和方法

　　取11例正常涎腺组织，其中9例腮腺及2例颌下腺；15例良性肿瘤，其中混合瘤8例，基底细胞腺瘤2例，肌上皮瘤2例，腺淋巴瘤3例；18例恶性肿瘤，其中腺泡细胞癌3例，粘液表皮样癌8例，腺样囊性癌4例，腺癌3例，患者年龄在21～43岁间，男女性别比为28：16。
　　对所采标本进行DNA提取，用HinfI进行彻底酶切反应。取一定量的已酶切的DNA，在0.8%琼脂糖凝胶上进行电泳，转移到硝酸纤维素滤膜上，然后与［r-P32］-dATP标记的探针(TTAGGG)4进行杂交，杂交后进行放射自显影检查。HinfI及(TTAGGG)4探针由大连宝泰克生物公司合成，［r-P32］-dATP由北京亚辉公司提供。
　　由于HinfI只能在端粒序列以外进行彻底酶切，不会在端粒序列内部进行切割，故经HinfI彻底酶切的DNA产生了含有完整的端粒重复序列的末端限制酶切片断(terminal restrict fragment TRF)及一部分含TTAGGG样序列的亚端粒DNA片断。我们知道一块组织标本中含有大量细胞，每个细胞中的端粒长度是不同的，变化较大，Southern杂交信号最强处是TTAGGG含量最丰富处。每个DNA片断所含端粒重复序列的数量是与DNA长度相应的。我们参考Harley［5］等人的实验方法并做一些改变，将杂交信号最强区域的中间带处DNA长度作为端粒的平均长度，以Marker为参照标准，比较泳道上位于15kb-1kb间杂交信号最强区域的中间带的位置，计算平均TRF值。通过TRF平均值可间接测得近似的端粒长度，对所测的TRF结果进行统计学分析。

结　　果

　　在正常涎腺组织的11个TRF在11.5kb～6kb间，平均TRF为9.45kb±1.55kb;良性涎腺肿瘤的TRF在8.25kb～4.15kb间，平均TRF为6.06kb±1.04kb;而恶性涎腺肿瘤的TRF在9.5kb～2.75kb间，平均TRF为5.76kb±2.37kb。值得一提的是，在18例恶性涎腺肿瘤中，有1例TRF值为9.5kb，超过正常涎腺平均TRF；有4例TRF值在7.0kb以上，比良性涎腺肿瘤平均TRF值高；有5例TRF极短，在4kb～2kb间。将良性及恶性涎腺肿瘤的平均TRF值分别与正常涎腺TRF平均值进行统计学分析，结果两者均有显著性差异，良性与恶性涎腺肿瘤的TRF均值进行比较，无显著性差异。

讨　　论

　　在肿瘤形成中，基因可表现为多种生物学行为异常，其中，端粒的异常可能是肿瘤细胞获得永生化最基本的生物学特征［6］，端粒—端粒酶假说认为：当端粒渐进性缩短，细胞分裂进入M1期间，DNA合成停止，多数细胞开始衰老，停止分裂；而有些细胞能绕过M1期继续分裂、生长，端粒继续缩短，细胞进入M2期，此时端粒几乎丧失，染色体不稳定，绝大多数细胞发生凋亡，只有极少数细胞在某些因素作用下激活端粒酶，延长端粒，恢复染色体稳定性而使细胞越过M2期获得永生性，最终发展为有无限增殖能力的肿瘤细胞。因此，从理论上讲，端粒缩短参与了肿瘤的发生。

责任编辑：姚红祥