【摘要】　目的　通过观察c-jun原癌基因在鼠牙胚中 的表达，探讨成牙本质细胞分化的转录调节。方法　利用免疫组化方 法检测c-jun原癌基因在鼠牙胚中的表达。结果　c-jun原癌基因在小 鼠牙胚的蕾状期、帽状期呈阴性表达，在钟状期牙胚的成牙本质细胞中呈阳性表达。结论　c-jun可能参与了成牙本质细胞分化的转录调节，并且可能成为成牙 本质细胞的标志分子之一。
　　【关键词】　原癌基因c-jun　　成牙本质细胞

　　c-jun基因属于细胞核原癌基因，在细胞分化过程中起重要作用。 该基因产物可以增加某些蛋白质的表达，如骨钙蛋白、碱性磷酸酶和胶原等。转化生长因子 -β超家族成员和许多其它生长因子能诱导成牙本质细胞的分化，已分化的成牙本质细胞表 达胞外基质和某些膜蛋白。本文利用免疫组化方法检测c-jun基因在小鼠牙胚发育过程中的 表达，以探讨成牙本质细胞分化的转录调节。

材料和方法

　　标本来源：选昆明种小鼠(第四军医大学动物中心)，雌性10只，雄性5只，体、 性成熟后以2：1雌雄同笼，同笼后第一天观察阴栓为第0天，选14天(蕾状期)、15天(帽状期 )、18天(钟状期)的胎鼠，40g/L多聚甲醛4℃固定24h，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，制备5μm厚连续切片，研究下颌第一磨牙牙胚情况。
　　免疫组化试剂：c-jun单克隆抗体(北京中山公司)，SP试剂盒(美国Zymed公司)，DAB试剂盒( 北京中山公司)。免疫组化染色采用SP法，切片脱腊至水，3ml/LH2O2室温下10min以消 除内源性过氧化物酶，微波处理15min，正常凌晨血清孵育30min，滴加一抗(1：50)，4℃湿 盒过夜，37℃复温1h，滴加生物素化二抗(1：100)，37℃孵育30min，酶结合物(1：100)37 ℃孵育30min，DAB显微镜下控制显色。上述各步之后均用0.01mol/mlPBS振洗3次，每次 5min。阴性对照用PBS代替一抗，常规脱水，二甲苯透明，封片。

结果

　　c-jun基因的染色部位位于细胞核，阳性结果为棕黄色颗粒。小鼠牙胚的蕾状期和 帽状期c-jun染色均为阴性，钟状期牙胚成牙本质细胞开始分化，c-jun在成牙本质细胞中呈 阳性表达。牙乳头其它细胞呈阴性表达(附图)。

　附图　钟状期鼠牙胚c-jun在成牙本质细胞中呈阳性表达，
牙乳头其它细胞呈 阴性。O成牙本质细胞，dp牙乳头(SP法，40×6.7)

讨论

　　原癌基因编码的蛋白质参与信号转导，许多激素、生长因子能诱导c-jun等原癌基 因表达，在细胞分化过程中起重要作用［1］。c-jun蛋白自身可以形成同源二聚体或 者与其它Jun蛋白或Fos蛋白形成异源二聚体，起转录因子作用，被称作激动蛋白(activator protein,AP-1)［2］。转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员、肿瘤坏死因子和上皮 生长因子等是AP-1的强有力的刺激因素［3］。已活化的AP-1转录因子能识别骨钙素 、碱性磷酸酶、Ⅰ型、Ⅲ型胶原的DNA序列(5’-TGA(C/G)TCA-3’)，随后使它们活化［ 4］。c-jun蛋白是AP-1转录因子的主要成分，是促细胞分化的强有力的激活剂。
　　在牙胚发育过程中成牙本质细胞的分化涉及许多胞外和胞内过程。大量研究证明胶原和非胶 原蛋白，包括骨钙素、骨连接素、骨桥素和牙本质磷蛋白等由成牙本质细胞表达，参与了牙 本质生成的胞外活动［5］。TGF-β超家族包括骨形成蛋白(BMPs)以自分泌或旁分泌 的方式调节成牙本质细胞的分化。然而，生长因子与细胞膜表面的膜蛋白受体结合后启动了 哪些下游分子，包括转录因子还不清楚。因为转录调节在细胞分化过程中起关键作用，而不 同细胞之间又有区别，因此检测c-jun基因在牙胚发育过程中的表达对了解成牙本质细胞分 化的调节具有重要意义。
　　实验结果表明c-jun只在成牙本质细胞中有表达，而未分化的牙乳头细胞不表达。该结果表 明c-jun参与了成牙本质细胞的终末分化的转录调节，而牙乳头其它细胞c-jun不被激活。有 研究证明c-jun与TGF-β超家族介导的信号网络有关［6］。与牙本质形成有关的一些 蛋白质，如碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型、Ⅲ型胶原等具有AP-1连接位点，而AP-1又是转录活 动中的关键性因子，因此提示c-jun很可能在转录水平上调节成牙本质细胞的表型。c-jun在 蕾状期和帽状期均不表达，在钟状期未成熟的成牙本质细胞，或称前成牙本质细胞也不表达 ，只有已经分化的成牙本质细胞才表达c-jun，因此可以把c-jun作为成牙本质细胞的标记分 子之一。c-jun在成釉细胞中也有表达，提示c-jun在成釉细胞的分化过程中也可能起重要作 用。

责任编辑：姚红祥