【摘要】　目的　探讨角化囊肿上皮细胞增殖特性，进一步了解角化囊肿的生物学行为，为临床治疗和预防复发提供一定的依据。方法　采用增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)免疫组化法和细胞核DNA含量分析，对牙源性角化囊肿、根尖囊肿、含牙囊肿和造釉细胞瘤上皮细胞进行对比研究。结果　角化囊肿上皮细胞增殖活跃，与造釉细胞瘤相似。提示角化囊肿生物学特性为上皮细胞主动生长，而非被动性膨胀生长。结论　角化囊肿可视为具有侵袭性生长的良性肿瘤，提出命名为“牙源性角化囊性瘤”更能反应其生物学特性。
　　【关键词】　牙源性囊肿　　细胞增殖　　牙源性角化囊性瘤

　　牙源性角化囊肿(odontogenic keratocyst)是口腔颌面部颇具特点的发育性颌骨囊肿，组织学上具有与其他囊肿不同的独特表现。临床表现易于复发，文献报告复发率为5%～62%［1］。尽管造成复发的因素较多，包括病变的临床特点和术者的手术技巧、经验等，均不能较完整地解释复发的原因。我们采用研究细胞增殖的多种方法，从多角度，以同属牙源性囊肿但生物学行为不同的根尖囊肿和含牙囊肿，以及生物学行为相似，但属临界性肿瘤的造釉细胞瘤相对照，系统深入地探讨角化囊肿上皮细胞增殖的特性，为了解角化囊肿的生物学行为提供一定的理论依据。

材料和方法

　　1.材料收集：选用我院病理研究室存档石蜡包埋组织共60例，其中角化囊肿15例，根尖囊肿15例，含牙囊肿15例，造釉细胞瘤15例。进行连续切片，厚度为5μm，共3张。一张行HE染色，进行常规病理诊断；一张行Feulgen染色，备DNA含量测定；另一张行抗增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)免疫组化染色。
　　2.免疫组化染色方法：采用DAKO公司PCNA单克隆抗体，工作浓度1∶300。ABC试剂盒购自中山生物技术公司。常规ABC免疫组化技术操作。以Tris缓冲液代替一抗做为对照。阳性结果为细胞核着棕黄色，背景清晰；阴性结果细胞核无显色。
　　3.PCNA阳性率计算方法：选择高倍镜下多个视野，分别计算阳性细胞占视野中细胞总数的比例，每例随机选择细胞数在1 000个以上。细胞阳性率(%)=阳性细胞数/总细胞数。
　　4.统计方法：阳性率计算以%为单位，取每组均值及标准差，用单因素方差分析进行统计。若方差不齐，采用非参数秩和检验方法进行比较。
　　5.细胞核DNA定量分析：各组随机抽取10例进行细胞核DNA含量分析。将Feulgen染色切片置于IBAS-I交互式自动图像分析系统上，分别对囊肿上皮细胞和造釉细胞瘤细胞进行测量。随机选择典型区域多个视野，由高分辨摄像机摄入镜下所测视野，显示于荧光屏上，经灰度调节及图像编辑，计算机自动测量出所测视野的细胞核DNA值。每例测量细胞200个以上，同时选择同张切片结缔组织内100个以上淋巴细胞，将其DNA含量均值做为正常二倍体对照。
　　6.结果输出及数据处理：将每例细胞核的DNA单值与正常二倍体值进行比较。2.5C以下代表近二倍体细胞，2.5～5C之间为增殖倍体细胞，5C以上为多倍体及非整倍体细胞。分别依据上述三项指标求出不同倍体占总细胞的百分数，并行单因素方差分析。

结果

　　1.PCNA免疫组化反应：牙源性角化囊肿阳性增殖细胞主要分布于基底层以上的棘细胞层，大多不超过棘层的一半。所有阳性细胞胞核着色深度基本一致，而基底层阳性细胞少，分布散在。细胞阳性率为33.50%(图1)。根尖囊肿上皮增殖细胞数量少，阳性细胞主要分布于基底层，而棘层阳性细胞少，且分布散在。细胞阳性率为20.62%(图2)。含牙囊肿上皮阳性细胞更少，分布稀疏，主要在基底层，棘层少见。细胞阳性率为12.76%。造釉细胞瘤阳性细胞主要在外周柱状细胞层，分布不均，中央星网状细胞层少见。细胞阳性率为30.31%(图3)。

　　以上各组细胞阳性率经统计学分析，角化囊肿与根尖囊肿、含牙囊肿相比较，差异有显著性(P＜0.05)，而与造釉细胞瘤比较差异无显著性。

责任编辑：姚红祥