仓鼠口腔癌变过程与人头颈部鳞状细胞癌形成过程相似，为了解表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor, receptor, EGFR)与头颈部鳞癌形成之间的关系，采用原位逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法对仓鼠口腔癌变过程中EGFR mRNA的表达进行了研究。
　　1.材料和方法：4周龄叙利亚金色仓鼠，实验组80只，对照组20只，用重石蜡油将二甲苯蒽(dimethyl-benzanthracene, DMBA)配成0.5%的溶液，涂抹鼠口腔右侧颊囊粘膜，3次/周，对照组只涂重石蜡油，分别于诱导4、8、16周处
　　作者单位： 510630 广州，中山医科大学附属第三医院耳鼻咽喉科(谢民强)；韩国庆北大学医学院耳鼻咽喉科(朴浚植)；韩国启明大学医学院病理科(李相淑)
死动物，取颊粘膜进行常规病理检查和原位RT-PCR。EGFR引物P15′-AATAT-TCT-TGCTGGATGCCTTTCTGTA-3′，P25′TTTCGATACCCAGGACCAAGCCACAGCAGG-3′，产物202 bP。组织脱蜡脱水，蛋白酶K消化，无RNA酶的DNA酶Ⅰ消化，按常规用反义引物P1进行原位逆转录，阳性对照不用DNA酶消化，阴性对照用焦碳酸二乙酯处理水代替引物。反应1 h后，100%乙醇处理，载玻片四周粘贴玻璃方框，其内加25 μlPCR混合液，含1 pmol/μl地高辛标记dUTP，进行原位DNA扩增，1-25个循环，用碱性磷酸酶标记的羊抗地高辛抗体检测，NBT/BCIP染色，甲基绿衬染。
　　2.结果：DMBA诱导4周末颊粘膜组织增生伴角质层增厚，8周末出现异常增生，16周末发生癌，对照组未发生任何组织学变化。用原位RT-PCR检测了7个增生，9个异常增生，35个癌和11个正常对照标本，结果正常粘膜中只有基底细胞表达EGFR mRNA，增生粘膜扩大到亚基底层，异常增生达全层，而癌组织中则弥漫性表达。PCR5个循环信号最清晰，无背景着色。
　　3.讨论：原位RT-PCR研究发现，从正常、增生、异常增生到癌，EGFR mRNA的表达逐渐增强，特别有意义的是被认为是癌前病变的异常增生组织中EGFR mRNA的表达几乎和癌一致，表明EGFR在细胞分裂增殖和从正常经癌前病变向癌转化的过程中发挥了一定作用。

责任编辑：姚红祥