【摘　要】　目的　观察灯盏细辛对白斑癌变过程中血管生成影响的形态特征，为阐明该药抗癌变机理提供实验依据。材料和方法　DMBA诱导金地鼠颊囊白斑癌变。用灯盏细辛流浸膏稀释液干预。经心分别灌注明胶墨汁和树脂预聚液，取颊囊标本分别作常规切片染色后图像处理和碱腐标本处理。得灯盏细辛组、模型组和空白对照组的血管截面积比值、血管密度值等数据以及颊囊微血管树脂铸形标本，作观察对比。结果　灯盏细辛组和模型组的血管截面积比值和血管密度值均显著高于空白对照组。此两组间P>0.05。微血管树脂标本比较显示灯盏细辛组的血管扩张和增生与模型组有明显的形态特征差异,而与空白对照组相似。结论　灯盏细辛有扩张血管和促进微血管增生作用，但形态结构良好。此“活血化瘀”作用可能是该药抗癌变基础之一。
　　【关键词】　灯盏细辛；血管生成；墨汁灌注；微血管树脂铸形

　　血管生成（angiogenesis)是20世纪70年代以来逐渐发展起来的肿瘤发生、转移及扩散的学说［1、2］。医学界普遍认为实体瘤的生长和转移都依赖于血管生成。以肿瘤血管系统为靶点的“抗血管生成疗法”应运而生，并且已经发现一些能够特异或非特异地抑制血管生成的药物［3］。但是，有关活血化瘀类中草药对癌血管生成影响的研究尚未见报导，更未见该类药物对血管生成形态特征的系统观察。据此，本文采用墨汁灌注图像分析和微血管树脂铸形等血管生成常用观察方法，对灯盏细辛(Herba Erigerontis,HEr)干预下金地鼠颊囊白斑癌变过程中的血管生成形态特征进行动态观察，为进一步探讨HEr抗癌机制提供实验依据。

材料和方法

　　材料
　　1.　实验动物　上海西普尔BK实验动物公司提供的叙利亚品系金黄地鼠48只。清洁级，封闭群,周龄3周，体重80～100g。在室温23～26℃，相对湿度75～80％，空气流通之环境中分笼饲养。喂食该公司出品的金地鼠全价营养颗粒饲料，饮普通水。
　　2.　实验试剂
　　2.1　化学致癌剂　0.5％二甲基苯丙蒽丙酮液（Dimethylbenzanthracene,DMBA)，自行配置：DMBA 1g，室温下加入到200ml丙酮液中，振(汤)/(皿)溶解，装棕色瓶中备用。
　　2.2　明胶墨汁灌注液　自行配置3％明胶墨汁液：30g明胶溶于1000ml墨汁液中，70～80℃水浴加热至充分溶解。
　　2.3　树脂预聚液　自行配置：甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸甲酯单体先用2％NaOH清洗后按9∶1比例混合，加入总液体量6％的过氧化苯甲酰，75℃～80℃水浴聚合5min，加染色剂苏丹Ⅲ，充分溶解后保存备用。
　　3.　实验仪器　KS400图像分析系统（Video Image Digital Analysis System);UMSP显微分光光度仪（Univesal Microspectrophotometer)由德国ZEISS公司提供。ACE摄像机，分辨率930线，由德国GRUNDIG ELECTRONIC公司提供。
　　4.　药物　HEr药材购自云南大理，干燥全草，由上海医科大学药学院生药学教研室按常规工艺制作，1ml HEr流浸膏=10g生药。
　　方法
　　1.　实验动物分组及处置　随机分为3组
 

　2.　白斑癌变模型制作　按Sally法DMBA诱导金地鼠颊囊粘膜上皮白斑癌变。
　　3.　明胶墨汁灌注和图像分析
　　3.1　灌注：氯氨酮2ml/kg腹腔注射麻醉动物，开胸暴露心脏，经心室插管至升主动脉，丝线先后结扎升、降主动脉，切开右心房，用含肝素的35℃～37℃温热生理盐水自导管灌注冲洗头颈部血管，至右心房流出液清亮为止。换3％明胶墨汁灌注，压力12～15Kpa，见口腔粘膜、头颈部皮肤、舌体、齿龈均呈黑色，取下双侧颊囊，切取涂药区组织块，常规固定，包埋，HE染色。
　　3.2　图像分析：前述图像系统中测量标本，280倍光镜下测量相邻3个视野内血管密度值（血管根数/mm2）和血管面积比（血管内腔面积/视野面积×100％），取平均值。
　　4.　树脂微血管铸形　按3.1步骤作血管预处置后，以0.5％戊二醛灌流固定，然后将少量单体灌入防止血管阻塞。将配置好的预聚液加入液体量1％的二甲基苯胺促进剂，混匀后，以12～15Kpa压力灌入，至右心房流出预聚液为止，结扎上腔及升主动脉。将动物置入60℃水浴30min，树脂硬化后完整取下双侧颊囊，40％KOH液腐蚀2h。流水冲去腐蚀组织，50％甘油浸泡2h。100％甘油保存铸形标本。肉眼观察血管粗细、排列、构形、渗漏等形态特征，摄照。

责任编辑：姚红祥