［摘　要］　目的　动态观察灯盏细辛(HEr)对金地鼠颊囊白斑癌变过程中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达规律的影响，探讨HEr抗白斑癌变的可能机理。方法　金地鼠102只随机分为模型组和HEr组，各用灯盏细辛流浸膏干预二甲基苯丙蒽(DMBA)诱导的金地鼠白斑癌变进程。免疫组化技术检测涂布DMBA 4-9周的颊囊标本α-SMA表达水平，并与模型组对照。结果　α-SMA连续性染色血管密度平均值HEr组为65.76，模型组为42.12(P<0.001)。按100％、50％、20％、10％、3％ 5级分档，HEr组的高分级例数远多于模型组(P<0.01)。结论　HEr有上调金地鼠白斑癌变过程中α-SMA表达水平的确切作用，提示该药可能通过保持血管肌上皮细胞正常生理功能和血管基底膜完整性发挥抗癌变功效。
［关键词］　灯盏细辛;α-平滑肌肌动蛋白;金地鼠颊囊;白斑;癌变

　　 α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)是由肌上皮细胞表达的一种细胞骨架蛋白。与血管的收缩功能及渗透性有关,见于肠、睾丸、卵巢、平滑肌、肌上皮细胞、周细胞、某些基底细胞等器官和组织细胞中。当血管平滑肌细胞功能正常时，α-SMA高表达。肿瘤血管的平滑肌细胞由于突变、基因序列丢失或插入等改变会影响α-SMA的正常表达，其免疫组化染色失去正常情况下的袖套状连续。α-SMA检测具有高度的平滑肌识别特异性，被用作血管肌上皮细胞分化程度和血管基底膜完整程度的良好标记物，在良恶性肿瘤的鉴别方面研究报道颇多［1-3］，但未见动态观察口腔白斑癌变，更未见中草药对其影响的研究报道。本文就灯盏细辛(Herba erigerontis, HEr)干预下的金地鼠白斑癌变动物模型α-SMA表达水平的变化规律进行研究，以探讨该药物的抗癌机制。

1　材料与方法

1.1　实验动物和分组
　　实验动物　叙利亚品系金地鼠102只，封闭群，3周龄，体重0.08-0.1kg，由上海西普尔－BK实验动物公司提供。按清洁级动物常规条件饲养，食该公司出品的金地鼠全价颗粒饲料。
　　分组　按随机原则分为3组：(1)空白对照组6只。常规饲养12周后，双侧颊囊涂布生理盐水4-9周，涂布期间每周处死1只，取双侧颊囊组织，得标本2份。(2)模型组48只，同上饲养12周后，双侧颊囊涂布二甲基苯丙蒽(dimethylbenzanthracene,DMBA)4-9周，涂布期间每周处死8只，得标本16份。(3)HEr组48只。喂服HEr 12周后处理同模型组。
1.2　化学致癌剂和动物模型制备
　　化学致癌剂　将1g DMBA加入到200ml丙酮液中，震摇溶解，装瓶备用。
　　动物模型制备　Salley法常规制备。
1.3　HEr制备和给药方式
　　HEr制备　HEr干燥全草，产自云南。常规工艺制成 1ml流浸膏（约 10g生药）。稀释 17.5倍后喂食。按成人每天服生药 15g的6倍计算给药量。
　　给药方式　以钝头针折弯一角度，外套细塑料管，长出针尖2-3mm，作为灌胃器。经口将药液直接灌入动物胃内，每日5滴，连续2周不间断。
1.4　免疫组化试剂和α-SMA检测
　　试剂盒　免疫组化试剂为ABC盒，由DAKO公司提供。自配缓冲液：TRIS-HCl液，0.5mol/L，pH 7.6。
　　α-SMA检测　标本常规包埋后连续切片，60℃烘箱内放置40min后恒温箱保持24-48h。然后按常规操作步骤作α-SMA免疫组化染色：脱蜡水化(二甲苯中15min×3次→梯度乙醇液中每次5min→蒸馏水冲净)；微波处理抗原决定簇(置缓冲液洗5min×3次→置0.1mol/L柠檬酸缓冲液中微波处理10min)；α-SMA染色前处理(缓冲液洗涤5min×3次→0.2%Triton-X100中10min→清水冲洗5min×3次→0.3%H2O2中浸泡5min→5%牛奶中孵育30min)；常规ABC法α-SMA染色。
　　观察计数　高倍镜下观察相邻3个视野内α-SMA连续性染色的血管数，按公式计算α-SMA阳性血管密度值(简称α-SMA值)。
　　α-SMA阳性血管密度值＝(连续性染色血管数)/(视野内血管总数)×100%

2　结果

2.1　白斑癌变动物的血管α-SMA表达情况

责任编辑：姚红祥