［摘　要］　目的　初步观察应用TNF-α基因治疗口腔癌的效果及不良反应。方法　通过颞浅动脉输入TNF-α基因修饰的口腔鳞癌DNL，试验治疗1例晚期颊粘膜鳞癌患者。结果　(1)应用PCR 技术在外周血淋巴细胞中检测到TNF-α基因；(2)外周血TNF-α活性及含量升高；(3)外周血中T细胞亚群CD4/CD8比例升高;(4)肿瘤缩小；(5)未见明显的不良反应。结论　提示该疗法能提高机体的免疫功能，有一定的临床效果，无明显不良反应。
［关键词］　TNF-α基因;口腔鳞癌;引流区淋巴结淋巴细胞

　　免疫活性细胞是最早用于人体肿瘤治疗的基因靶细胞,国外用带有TNF-α基因的TIL治疗了部分恶性黑色素瘤患者，证明其安全可靠［1,2］。曾用缺陷型逆转录病毒将α-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)基因导入口腔鳞癌引流区淋巴结淋巴细胞(draining lymph node lymphocyte,DNL)，对转导基因后DNL体外抗肿瘤效果及其生物学和免疫学特性进行分析，证明转导TNF-α基因能提高DNL的抗肿瘤活性，对DNL的生物学及免疫学特性无明显影响。本文在此基础上对转导基因DNL进行临床初试，从1例晚期颊粘膜鳞状细胞癌患者的颈部淋巴结中分离出淋巴细胞,在体外将TNF-α基因导入其中，并回输到患者体内，初步观察了其对机体免疫功能的影响、抗肿瘤效果及有无不良反应。

1　病例和方法

1.1　病例报告
　　患者，男，59岁。左颊粘膜鳞癌，在外院行颊颌颈联合根治术，术后复发。1994年7月来我院就诊，以左颊粘膜鳞状细胞癌术后复发收入院。入院时精神状态差、食欲不振、消瘦、轻度贫血面容。左侧面部肿胀:前内侧界至鼻侧,后外侧至耳前,上界至颧弓上2cm,下界至口裂水平。开口度1.5cm，病灶已侵犯上颌骨及周围组织，腭部有一4cm×4cm×3cm的肿块突向口腔。右颈上部触及2个肿大淋巴结，大者直径约3.5cm,未见远处转移。磁共振成像（MRI）显示，病变累及左上颌窦内、颞下间隙及翼腭间隙，左上颌窦前、外、后壁破坏，左侧翼外肌部分受累，左腭部可见软组织向下延伸。临床诊断：左颊粘膜鳞癌术后复发，rT4N2cM0(UICC分类)。
1.2　DNL的分离、培养、基因转导及转导后的检测
　　取右颈深上肿大淋巴结2个，从中分离出DNL，在含rIL-2的培养基中培养，待细胞进入对数生长期后，用缺陷型逆转录病毒载体LXSN.TNF-α上清液(上海第二医科大学人类基因治疗研究中心提供)对DNL进行转染。转导后用PCR技术、TNF-α活性检测技术(L929细胞检测法）、G418培养基筛选实验，对转导TNF-α基因后的DNL中外源基因及其表达产物进行检测。待确定TNF-α基因已导入DNL并能够表达后，应用MTT法比较转导及未转导基因DNL的体外抗人舌鳞癌Tca8113细胞活性，前者活性高于后者。
1.3　转导基因DNL输入体内途径及方法
　　采用颞浅动脉插管输入。解剖颞浅动脉，将末端连有“泵”的导管从颞浅动脉逆行插入，导管前端插入髁状突下8cm处。固定导管，将血管外的部分导管及“泵”埋在颞部皮下，关闭创口。造影证实，导管前端插至上颌动脉起始处稍下方。通过皮肤及“泵”表面的硅橡胶膜刺入“泵”内输入DNL。将细胞溶解于2ml生理盐水中，缓慢推注，每天注射1次，输入细胞总数为8.68×108。 治疗后进行临床及MRI检查，并观察治疗期间的不良反应。
1.4　静脉血TNF-α活性检测
　　取输入细胞前及第1次输入细胞后4h的静脉血，分离淋巴细胞，用PCR技术检测TNF-α基因。取输入细胞前及第1次输入细胞后1h、2h、4h、8h、24h的静脉血,用L929细胞检测TNF-α活性。
1.5　治疗前后免疫功能检测
　　取治疗前及治疗后的静脉血，用间接免疫荧光法检测CD3+、CD4+、CD8+细胞；用酶联免疫检测技术（ELISA）检测TNF-α含量。

2　结果

2.1　静脉血淋巴细胞PCR结果
　　治疗前患者血淋巴细胞无TNF-α基因阳性扩增带；第1次输入细胞后4h可见明显的阳性扩增带。

责任编辑：姚红祥