［摘　要］　目的　阐明口腔癌变细胞增殖与分化异常的表型特征。方法　LSAB免疫组化方法检测69例4-硝基喹啉-1-氧化物（4NQO）口服诱发大鼠舌癌变各期组织分化标志gp230和增殖标志增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果　随口腔癌变进展，基底上层gp230表达逐渐减少；基底层PCNA表达逐渐增强。结论　口腔癌变既是细胞增殖异常，又是细胞分化异常疾病。
［关键词］　舌；癌变；gp230；增殖细胞核抗原

　　 在生命过程中，增殖和分化始终是细胞的两个最基本的生命活动。细胞通过增殖增加数量，通过分化使其结构和功能特化，两者呈对立统一、相互依存的关系，细胞癌变不仅是细胞增殖病，也是细胞分化病。口腔癌发生是一个多阶段过程，从组织形态学看，一般表现为单纯性增生→异常增生→原位癌→侵袭性癌这样一个自然病程。在建立4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitroquinoline-1-oxide, 4NQO)饮水诱发大鼠舌癌变模型的基础上，应用LSAB免疫组织化学技术观察鳞状分化标志物——gp230［1］和增殖标志物——增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen , PCNA）［2］在大鼠舌癌变过程中的变化，以阐明口腔癌变细胞增殖与分化异常的表型特征。

1　材料与方法

1.1　标本来源
　　69例4NQO饮水诱发大鼠舌癌变组织存档蜡块，病理分级按WHO（1978）标准［3］：正常8例；单纯性增生8例；轻、中度异常增生共8例；重度异常增生18例；原位癌11例；鳞癌16例。
1.2　试剂
　　(1)一抗（表1）；(2)LSAB试剂盒（DAKO）

表1　一抗的名称、来源、工作浓度及其特异性
Tab.1　Antibody I:types,sources,concentration and feature
 

抗体*	克隆	来源	工作浓度	特异性
鼠抗人gp230单抗	PANH4	丹麦Copenhagen大学	未稀释	复层标志
		Nielsen PA教授惠赠
鼠抗人PCNA单抗	PC10	DAKO	1∶100	增殖标志

*不同种属间gp230、PCNA存在交叉免疫反应 1.3　微波抗原修复LSAB免疫组化染色步骤 　　在经0.01%多聚赖氨酸（PLL）处理过的载玻片上作4μm连续切片4张。其中，1张作HE染色，1张用PBS替代一抗作阴性对照；另2张分别作上述抗体的免疫组化染色。切片38℃烘干，二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液脱蜡，梯度乙醇（100%→70%）水化，3%H2O2-甲醇室温下30min阻断内源性过氧化物酶。切片浸没在0.01mol/L pH6.0柠檬酸钠缓冲液中，700W微波炉中高功率5min，冷却后加入正常兔血清（1∶20），室温下30min。分别滴加上述一抗，4℃孵育过夜，次日复温1h后，PBS轻度震摇漂洗5min×3次。加入兔抗鼠免疫球蛋白（1∶200），室温下40min，PBS漂洗5min×3次。加入抗生蛋白链菌素（SA 1∶200），室温下30min，PBS漂洗5min×3次。DAB显色5-15min， Mayer苏木素复染，梯度乙醇（70%→100%）脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 1.4　结果判断 　　gp230以胞浆内出现黄色或棕黄色染色为阳性细胞,PCNA以胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。根据口腔粘膜上皮细胞特点及单抗特异性将染色结果分为：(1)gp230　（+）25-50%基底上层细胞呈阳性；（）51-70%基底上层细胞呈阳性；（）70%以上基底上层细胞呈阳性；（-）上皮细胞无阳性。(2)PCNA　（+）基底层细胞呈阳性；（）基底层和50%以下基底上层细胞呈阳性；（）基底层和50%以上基底上层细胞呈阳性。 1.5　统计学处理 　　在SPSS（7.5）统计软件下，将数据作合理合并，结果采用计数资料的结构相对数（%）表示，统计学分析采用行×列χ2检验或Fisher’s确切概率法。 2　结果 2.1　gp230表达(见表2)。 表2　gp230在口腔癌变过程中的表达 Tab.2　The expression of gp230 in oral carcinogenesis

组织学	例数	-	＋			强阳性率 (-,%)
正常a	16	0	0	2	14	100.0
正常粘膜上皮	8	0	0	0	8
单纯增生上皮	8	0	0	2	6
癌前病变b	26	0	20	6	0	23.1
轻中度异常增生	8	0	5	3	0
重度异常增生	18	0	15	3	0
口腔癌c	27	24	3	0	0	0
原位癌	11	9	2	0	0
鳞癌	16	15	1	0	0

责任编辑：姚红祥