提　要　本研究采用微波处理暴露抗原，通过免疫组化LSAB方法对NOM 6例，OPL 28例，OSCC 34例中P53蛋白表达进行观察，其结果NOM无表达；在OPL中的表达率为82％随着上皮异常增生的程度加重，表达率呈上升趋势（P＜0.05）；而在OSCC中表达率为65％，随着肿瘤的分级增加，表达率呈下降趋势（P＜0.05）。结果表明，P53蛋白在OPL和OSCC中呈异常表达，并与OPL程度和OSCC分级有关，提示P53基因在OSCC发生发展过程中具有一定作用。
　　关键词　正常口腔粘膜　　口腔癌前损害　　口腔鳞状细胞癌　　P53蛋白

　　本研究采用微波处理暴露抗原，通过免疫组织化学方法对正常口腔粘膜（Normal oralmucosa,NOM）、口腔癌前损害（Oral precancerous lesion,OPL）和口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC）中P53蛋白表达进行观察和分析，以期为口腔粘膜癌变机制的研究提供依据。

材料和方法

　　1.　试剂：DAKO-P53,DO-7单克隆抗体（DAKO公司，1：200）；LSAB试剂盒（DAKO公司，1：150）；DAB显示剂（Sinma公司，1：150）。
　　2.　标本：选择NOM　6例，OPL　28例，OSCC　34例，所有标本均经10％中性福尔马林固定，石蜡包埋。一般情况见表1。

表1　68例观察标本的一般情况

病 理 诊 断	病 理 分 级	例　数
NOM	0	6
OPL	轻	9
	中	6
	重	13
OSCC	Ⅰ	13
	Ⅱ	15
	Ⅲ	6

　上述关于OPL诊断分类参考WHO　1978的标准，OPL上皮异常增生分轻、中、重度；OSCC分级参考WHO　1971年的标准，分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。
　　3.　实验方法：将每个标本连续病理切片3张（5μm），其中，一张作HE染色，一张作空白对照，一张作P53蛋白免疫组化染色。常规脱蜡，脱水，置3％过氧化氢甲醇溶液中孵育30分钟，将切片置入蒸馏水，微波炉内处理10分钟（功率550W），待切片冷却后，按免疫组化ABC法常规操作。空白对照组以PBS代替I抗，其余步骤同免疫组化。
　　4.　观察内容：P53蛋白表达分布情况：阳性细胞为胞核呈棕黄色颗粒；P53阳性表达率变化情况：统计处理（χ2检验）。
结　果

　　1.　P53蛋白阴性染色：NOM和阴性对照切片
　　2.　OPL的P53蛋白阳性染色。（图1）

图1　OPL的中度上皮异常增生，P53阳性细胞位于基底层和上皮浅层

　　轻度上皮异常增生：位于基底层，阳性细胞着色浅，数量少。
　　中度上皮异常增生：阳性细胞位于基底层和基底旁层。
　　重度上皮异常增生：阳性细胞位于基底层和上皮浅层。胞核着色变深，数量剧增。
　　3.　OSCC的P53蛋白阳性染色：阳性细胞分布在癌巢周和侵袭前沿区，胞核着色明显变深，数量剧增（图2、3、4）

图2　OSCCⅠ级阳性细胞呈散发型分布

图3　OSCCⅡ级阳性细胞呈灶型分布

图4　OSCCⅢ级阳性细胞呈泛染型分布

　　（1）Ⅰ级：主要呈散发型分布
　　（2）Ⅱ级：主要呈灶染型分布
　　（3）Ⅲ级：主要呈泛染型分布
　　4.　P53蛋白表达情况（表2）。

表2　P53蛋白在NOM、OPL和OSCC中
表 达 情 况（68例）

病理诊断	病理分级	例数	阳性例数	阳性率％
NOM	0	6	0	0
OPL	轻	9	6	66.7
	中	6	5	83.3
	重	13	12	92.3
OSCC	Ⅰ	13	11	84.6
	Ⅱ	15	9	60.0
	Ⅲ	6	2	33.3

　表2显示OPL组总的P53蛋白阳性表达率约为82％，不同异常增生之间差异有显著性（P＜0.05）。总趋势是随着上皮异常增生程度加重；OSCC组P53蛋白表达阳性率约为65％，在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分级中差异有显著性（P＜0.05）。总趋势P53蛋白表达的阳性率呈下降趋势。
讨　　论

　　本研究结果，P53蛋白在NOM无表达，在OPL表达率82％，随着上皮异常增生程度加重，表达率呈上升趋势，而在OSCC中表达率65％，在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分级中表达率呈下降趋势，结果显示，P53蛋白在OPL和OSCC中均呈异常表达，其表达率与癌前损害程度和肿瘤分级有关。关于P53基因在肿瘤恶变初期阶段，还是晚期发挥作用，目前尚有争议。Ogden等报导，在正常、良性及癌前病变的口腔及宫颈粘膜中P53蛋白无表达，认为P53蛋白的异常表达与癌变的晚期有关〔1〕。但近来Regezi等研究认为，P53蛋白表达与OSCC发生的早期有关〔2〕。本研究P53蛋白在OPL和OSCC均有较高的表达率，提示P53基因在OSCC发生发展过程中具有一定作用，其作用机制有待进一步深入研究。

责任编辑：姚红祥