摘　要：目的:建立小鼠舌体移植瘤颈淋巴结转移模型，探讨癌周淋巴管的病理改变与淋巴道转移的关系。方法:将U14的腹水瘤细胞移植于昆明小鼠舌体内，分期分批切取舌体组织，改良5′-核苷酸酶组化染色法显示癌周淋巴管。结果:小鼠舌体接种U14肿瘤细胞后颈淋巴结转移率可达70％；U14肿瘤细胞进入淋巴管腔的方式主要有2种，即通过正常管壁开放间隙和造成管壁缺损进入淋巴管腔。结论:随着移植瘤的生长，瘤周淋巴管不断扩张，管壁结构出现不完整，有利于肿瘤细胞进入淋巴管腔进而发生淋巴结转移。
关键词：淋巴管 肿瘤 转移

　　小鼠子宫颈癌14号(U14）是我国学者李铭新、蔡海英等用甲基胆蒽线结穿进幼鼠宫颈后移植于昆明成年小鼠皮下诱发的一个异位子宫颈癌［1］。该瘤株的特点是细胞分化低，增殖能力强，动物接种存活率可达100％，浸润和转移性极强。近年来已有学者［2～4］将U14移植于小鼠的爪垫、背侧皮下等不同部位以研究其生长规律和生物学特性，并在此基础上建立了具有不同特性的肿瘤转移模型，为肿瘤转移的防治研究提供了重要手段。本研究利用舌体组织具有丰富的毛细淋巴管这一解剖特点，将U14的腹水瘤细胞移植于昆明小鼠舌体内以建立小鼠舌体移植瘤颈淋巴结转移模型，观察癌组织生长过程中癌周淋巴管的病理改变及其与淋巴道转移的关系，为研究口腔舌癌的转移规律提供新的手段。

1　材料和方法

1.1　实验动物及肿瘤来源
　　昆明小鼠60只，雌雄各半，体重25～30 g/只，鼠龄8～10周。将液氮冻存的原昆明小鼠子宫颈癌瘤株进行复苏并经体外培养增殖，生长稳定后以5×10\+6细胞量接种于昆明小鼠腹腔内，待其长出癌性腹水后供实验用。
1.2 接种方法
　　取腹腔接种后第7天的癌性腹水，加入无菌生理盐水使之稀释成为1×107/ml的浓度。分别于每只小鼠舌体背侧中份舌肌内注射0.05 ml(含瘤细胞5×105)，共接种60只小鼠。将小鼠随机分成 6组，每组10只。
1.3 标本处理
　　接种后l、5、10、15、20 d处死动物，剩余1组待其自然死亡。切取整个舌体组织及其对应颈部淋巴结。带瘤舌体组织经恒冷切片机连续切片，片厚10 μm,吹干后冷丙酮(4℃)固定5 min,作淋巴管的改良5′-核苷酸酶（5′-Nucleotidase，5′-Nase）组织化学染色，即先按Wachstein法作5′-Nase染色反应，苏木素伊红（HE）复染后封片。部份带瘤舌体组织及其对应颈部淋巴结则作常规石蜡包埋切片，HE染色。

2　结 果

2.1　大体观察
　　接种U14细胞后5 d即可见注射区域舌体组织局部膨隆，呈灰白色。到20 d时几乎所有小鼠都因舌体肿大而不能闭口，舌体固定。接种后所有小鼠舌体内均有肿瘤组织生长，无一例有消退现象。带瘤自然死亡组小鼠平均生存时间22.40 d±2.45 d,最长存活时间为25 d。接种后5 d即可见部分小鼠颈部淋巴结肿大。到20 d时，几乎所有小鼠淋巴结均明显长大。
2.2　病理组织学观察
2.2.1　HE染色切片观察 接种后5 d，U14细胞主要在肌间隙内顺肌肉长轴生长，10 d后逐步向间隙周围肌肉及粘膜下浸润，到20 d后几乎所有肌肉组织及大部份粘膜下组织结构均被浸润破坏，部分肿瘤区域出现坏死。
　　15 d后开始出现转移，20 d后颈部淋巴结内发现转移灶者增多，转移率达70％。早期肿瘤细胞仅在边缘窦内密集成堆或排列成行，晚期则从边缘窦向中间窦及髓窦发展，严重者整个淋巴结原有的结构已大部分被破坏，仅留少量淋巴组织，且癌组织中央部位可出现坏死。部分淋巴结的输入淋巴管及输出淋巴管内都查见了癌细胞栓。
2.2.2　酶组织化学染色切片观察 5′-Nase染色切片可见毛细淋巴管壁呈棕褐色，主要分布于癌细胞周围组织及癌细胞所包绕的残余肌肉组织内。除因大块的癌组织挤压使邻近的毛细淋巴管被压闭外，癌周组织内毛细淋巴管多数呈不同程度的扩张（图1）。随着肿瘤的生长，开放淋巴管的数目有增加的趋势，部分淋巴管壁结构出现不完整（图2)。肿瘤接种后10 d，常可见有大量的癌细胞聚集在扩张的毛细淋巴管周围，有的癌细胞贴附在毛细淋巴管壁上。15 d后可观察到单个或成簇的癌细胞经扩张开放的毛细淋巴管壁进入淋巴管腔（图3)。而在20 d后常可见包绕淋巴管壁的肿瘤细胞破坏淋巴管壁的一部份而侵入淋巴管腔（图4）。

责任编辑：姚红祥