【摘要】　目的　研究螺旋藻对二甲基苯并蒽(DMBA) 诱发的金黄地鼠口腔癌的预防作用。方法　选用DMBA诱发金黄色地鼠 口腔癌模型，同时用1.0g/kg、0.3g/kg螺旋藻进行预防，进行口腔肿瘤发生率、癌 变率、微核细胞率、细胞增殖核抗原(PCNA)和上皮生长因子受体(EGFR)检测。结 果　螺旋藻高、低剂量组平均瘤负荷抑制率分别为74.2%和59.8%；癌变 率、微核细胞率和PCNA标记指数与阳性对照组相比均明显降低，但对EGFR表达没有影响。结论　螺旋藻对DMBA诱发的动物口腔癌有预防作用。
　　【关键词】　螺旋藻　　口腔癌　　DNA损伤　　增殖

　　癌症的化学预防是继癌的化学治疗后出现的一个新的研究领域，天 然产物对癌的化学预防是目前研究的热点之一，螺旋藻就是目前受到普遍关注的天然抗癌药 物。研究表明螺旋藻对实验性口腔癌有一定预防作用，但对其防癌机制未见报道。本研究选 用DMBA诱导的金黄地鼠口腔癌模型进行螺旋藻对口腔癌的预防研究，并从DNA损伤和细胞增 殖等方面探讨螺旋藻防癌作用机理。

材料和方法

　　一、螺旋藻由施普瑞公司提供。叙利亚金黄地鼠和饲料购自中国预防医学科学 院流行病研究所动物中心。DMBA购自Sigma公司；鼠抗大鼠PCNA抗体、鼠型ABC试剂盒均购自 Vector公司。
　　二、90只雄性金黄地鼠，体重为40g～60g，随机分为4组，阳性对照组仅涂DMBA(0.5% DMBA溶于丙酮，每次涂DMBA0.10ml,每周涂3次，共涂14周)，两试验组DMBA处理同阳性 对照组，同时分别给1.0g/kg、0.3g/kg螺旋藻(配成10%、3%浓度溶液，以1ml/100g 量每天给地鼠灌胃)；阴性对照组涂丙酮，试验期间，每2周称体重1次，肉眼观察颊囊粘膜 变化。试验结束后处死动物，计数口腔肿瘤数目。量取每个瘤的长、宽、高，以其平均值作 为瘤的半径，计算平均瘤负荷(平均瘤负荷=平均瘤数目×平均瘤体积，瘤体积=4/3πr3)。 同时取口腔粘膜组织，进行以下指标检测：①病理观察：切片进行常规HE染色，光镜观察， 病理改变按WHO 1978年公布的12条标准进行判定，将其分为单纯增生、轻中度异常增生、重 度异常增生和癌(图1、2)。②组织微核检测：切片采用Feuglen染色，在×100倍油镜下进行 口腔上皮细胞微核观察。每张切片计数500个上皮细胞，共计1000个细胞中含微核的细胞数 ，微核发生率以千分率表示。③PCNA和EGFR测定：用免疫组化ABC法［1］。结果：PC NA阳性细胞为细胞核染成棕黄色，PCNA标记指数以每100个细胞中的PCNA阳性细胞数表示(图 3、4)。EGFR阳性细胞为细胞膜和细胞浆染成棕黄色。根据每100个细胞中的EGFR表达阳性细 胞数将其分为阳性Ⅰ级(0%～25%)、Ⅱ级(26%～50%)、Ⅲ级(51%～75%)、和Ⅳ级(76%～100%) 。

图1　对照组金黄地鼠颊粘膜重度异常增生（HE×40）

图2　对照组增生上皮癌变（HE×40）

图3　金黄地鼠正常颊粘膜基底细胞PCNA阳性（ABC法×200）

图4　对照组金黄地鼠颊粘膜中度异常增生，PCNA阳性细胞达上皮全层1／2（ABC法×200）

结　　果

　　1.一般状况观察：整个试验期间各组动物生长良好，无动物死亡，阳性对照组和 各试验组动物体重比较无显著性差异。
　　2.螺旋藻对DMBA诱发的地鼠口腔癌的影响：肉眼观察，正常地鼠颊囊粘膜呈淡红色、菲薄、 透亮、血管清晰，涂DMBA后，粘膜变得粗糙，呈现白斑样改变，逐渐出现肿瘤。涂DMBA14周 后，各组动物肿瘤发生情况见表1。阴性对照组无1只动物发生肿瘤。组织病理观察，14周后 阳性对照组96%发展为原位癌或浸润癌，螺旋藻低剂量组癌变率为76%，高剂量组为64%，经 χ2检验，与阳性对照组有显著性差异。

表1　螺旋藻对DMBA诱发的地鼠口腔癌的影响

组别	动物数	平均瘤数目	抑制率(%)	平均瘤体积mm3	平均瘤负荷mm3	抑制率(%)
阳性对照组	25	2.89±1.42		74.1±25.1	214.5
0.3%螺旋藻	25	1.85±0.81a	39.8	49.4±15.1	85.9a	59 .8
1.0%螺旋藻	25	1.74±0.78a	35.0	38.1±19.4	55.2a	74 .2
阴性对照组	15	0	0	0	0	0

责任编辑：姚红祥