提　要　本实验通过定量免疫组化方法，研究了舌癌顺铂白蛋白微球栓塞治疗前后肿瘤中血管和增殖细胞的改变及其相互关系，发现两者在栓塞后随着时间的推移均逐渐减少，前者至灌注后四周时已接近正常舌粘膜水平，灌注后五周与正常舌膜无显著差异,在粘膜下组织中已无法发现PCNA染色阳性的肿瘤细胞，后者至第四周时已接正常舌粘膜水平。两者间变化呈指数曲线正相关关系，从而为基于阻断肿瘤血供及药物缓慢持续作用的舌癌含药微球栓塞性化疗提供了实验研究的依据，说明将增殖细胞阳性比例作为治疗效果的监测指标是切实可行的。
　　关键词　人舌癌　　顺铂—白蛋白微球　　栓塞性化疗　　增殖细胞核抗原　　血管密度

　　本实验采用高灵敏度的LSAB染色法，定量检测人舌癌顺铂白蛋白微球栓塞化疗前后血管密度和增殖细胞核抗原阳性细胞比例，研究两者之间的相关关系，从而对临床疗效进行评价。

材料与方法
　　研究对象
　　本组舌癌病例共11例，其中男性6例，女性5例，年龄32～68岁，舌腹部鳞癌1例，舌缘鳞癌10例。计数高倍镜（10×40）下肿瘤团块中的PCNA阳性细胞数，肿瘤组织中任何单一的，明显褐色的并与周围细胞明显分离的细胞均被计数，测量方法同血管密度。共计10个视野，取平均数，即得出每个标本的增殖细胞比例（增殖细胞数/细胞总数×100％）。
　　LSAB免疫组化染色及血管密度、增殖细胞计数，分别请有经验的病理医师取双盲法进行，以确保结果的可靠性。

结　果
　　1. PCNA阳性定位分布
　　正常舌粘膜中有少量阳性细胞，局限在基底细胞层（图1）。舌癌灌注前阳性细胞比例明显增高，分布不均匀，主要分布在癌巢周围的基底细胞区和癌周边区（图2）。灌注后各个不同时期，阳性细胞比例逐渐下降，表现为周边区及基底区阳性细胞减少，到第五周时，已无PCNA阳性的肿瘤细胞，仅在粘膜下组织中有散在PCNA染色阳性的炎性细胞和成纤维细胞分布，舌粘膜中PCNA分布和正常舌粘膜相似（图3，4，5）。
　　2. F8—RA阳性定位分布
　　F8—RA主要表现为点状阳性，被染成褐色，定位于内皮细胞质中，正常口腔粘膜仅见粘膜下少量血管散在分布（图5）。舌癌灌注前微血管密度明显增加，集中分布在细胞增殖旺盛区域的间质内（图6）。术后F8—RA逐渐减少，到第四周时已基本恢复至正常粘膜水平。F8—RA与PCNA阳性分布相一致（图7，8）。

图1　 正常人舌粘膜基底细胞层中有少量PCNA阳性细胞，PCNA呈颗粒状分布，被染成褐色，局限在细胞核中。LSAB法免疫组化染色×20
　　图2　人舌癌CDDP—AMS灌注前PCNA阳性细胞比例明显高，分布均匀，主要分布在癌巢周围的基底细胞区和癌周边区。LSAB法免疫组化染色×20。
　　图3　CDDP—AMS灌注后一周，PCNA阳性细胞比例有所下降，分布基本和灌注前相同。LSAB法免疫组化染色×20
　　图4　CDDP—AMP灌注后五周，PCNA阳性细胞比例和正常舌粘膜相似，主要分布在粘膜基底细胞的细胞核中，粘膜下结缔组织中有散在的PCNA阳性细胞（炎性细胞或成纤维细胞）分布。LSAB法免疫组化染色×20
　　图5　正常人舌粘膜下有少量Ⅷ因子相关抗原（F8—RA）分布，为点状分布，被染成褐色，定位于内皮细胞质中，LSAB法免疫组化染色×20
　　图6　CDDP—AMS灌注前舌癌微血管密度明显增加，集中分布在细胞增殖旺盛区域（癌巢周围）的间质中。LSAB法免疫组化染色×20
　　图7　CDDP—AMS灌注后一周，人舌癌微血管密度有所下降，分布基本和灌注前相同。LSAB免疫组化染色×20
　　图8　CDDP—AMS灌注后四周，微血管密度基本和正常舌粘膜接近。LSAB法免疫组化染色×20

　　3.LSAB法染色计量检测
　　增殖细胞比例（％）和血管密度（条/mm2）测量结果如（表2）。

　　表2　增殖细胞比例（％）和血管密度（条/mm2）（％）测量结果

分　　组	增殖细胞x±s	血管密度（x±s）
正常舌粘膜	14.40±1.04	16.7197±2.1397
灌注前	69.84±2.71	53.7420±2.0981
灌注后一周	55.43±2.11	40.0080±1.9794
灌注后二周	45.46±1.66	29.2596±1.8883
灌注后三周	32.77±1.63	22.2930±2.2597
灌注后四周	17.22±1.67	16.9188±1.9344
灌注后五周	0	16.5207±2.6622
灌注后六周	0	16.7261±2.9967

责任编辑：姚红祥