提　要　目的　为了探明ras p21癌基因在涎腺良恶性肿瘤生物学行为中的作用，方法　采用LSAB免疫组化染色技术及CMIASWIN免疫组化图像分析系统，镜下定量判断正常涎腺，良恶性肿瘤ras p21癌基因表达的阳性单位（PU值），通过t检验和方差分析，结果　正常涎腺组，良性肿瘤组、恶性肿瘤组均有ras p21表达，良恶性肿瘤组PU值明显高于正常组（P<0.01)。胞浆中PU值明显强于胞核、阳性细胞最多见于腺管样区，恶性肿瘤及瘤旁腺泡分别为强阳性和弱阳性表达，复发性腮腺深叶包膜不完整的肿瘤其PU值明显高于原发性腮腺浅叶包膜完整的肿瘤。结论　实验结果表明ras p21癌基因的激活在涎腺良恶性肿瘤的发生和发展过程中起着重要的作用。
　　关键词　涎腺肿瘤　　ras p21　　癌基因

　　有关ras基因的研究表明，它是人体的一个重要原癌基因，已见有关ras p21癌基因在人体各部位肿瘤中表达的报道〔1，2〕。本研究应用免疫组化技术对涎腺瘤中ras p21表达进行定量分析，探讨ras p21癌基因在涎腺良恶性肿瘤中的表达及其临床意义。

材料与方法
　　病例选择：从1990～1997年本院存档的石蜡标本中，分别选出腮腺多形性腺瘤（包括复发病例），基底细胞腺瘤、恶性多形性腺瘤、腺样囊性癌、粘液表皮样癌、腺泡细胞癌、腺癌等68例，其中良性肿瘤38例，恶性肿瘤30例，良恶性肿瘤中各选2块局部淋巴结标本。另选正常涎腺组织标本8例。男性36例，女性32例，年龄为12～73岁，平均38岁。肿瘤直径最大者8cm，最小者1cm。肿瘤位于腮腺深叶者29例，位于浅叶者39例。包膜完整者39例，不完整者29例，原发者58例，复发者10例。
　　染色方法：鼠抗人p21蛋白多克降抗体购自美国Santa cruz公司。4μ组织切片→PBS冲洗5分钟→室温下加1％H2O2阻断内源酶10分钟→PBS冲洗→微波处理、自然冷却至室温→PBS冲洗→加一抗4℃过液→PBS冲洗→加二抗37℃30分钟→PAP 37℃ 30分钟→PBS冲洗→SAB显色→苏木素复染→梯度脱水→透明→封片镜检。
　　结果判定：评分标准，采用定量评估法凡胞浆，胞核内棕色表达颗粒均为阳性目标，其阳性目标PU值0分者为阴性，5分以下者为弱阳，5分以上者为阳性，10分以上者为强阳。随机选4个高视野（400×），以平均数为分值。
　　④ 统计处理：在CMIASWIN真彩色病理图像分析系统上计录目标总个数，搜寻阳性目标总个数，测量阳性目标总面积，统计面密度和数密度，根据表达强度，测定阳性目标单位（PU值），将所获资料进行方差分析，q检验和t检验，检验水准取双侧a=0.05。

结　果
　　正常腺体，良性肿瘤，恶性肿瘤p21蛋白表达免疫组化图像统计分析示表1。

表1　P 21蛋白表达图像统计分析（um）

	阳性细胞数	阳性细胞面积	面密度	数密度
正常腺体	1144±526	650±358	0.137±0.07	0.241±0.11
良性肿瘤	1046±332	676±296	0.143±0.06	0.221±0.07
恶性肿瘤	854±185	528±230	0.111±0.04	0.180±0.03
	F=1.26	F=0.65	F=0.62	F=1.25
	P>0.05	P>0.05	P>0.05	P>0.05

表1所示，免疫组化图像分析提示、阳性细胞数、阳性细胞面积以及面密度，数密度在正常腺体，良恶性肿瘤之间微有差别，经方差分析，均无显著性（P>0.05）表明观察方法和手段在三组中是一致的。 　　正常腺体，良性肿瘤，恶性肿瘤p21蛋白表达免疫组比PU值示表2。 表2　p21蛋白表达图像PU值比较

		组数	q值	P
1.正常腺体	4.531±2.963	1与2	29.17	<0.01
2.良性肿瘤	12.00±2.246	1与3	44.99	<0.01
3.恶性肿瘤	16.05±3.663	2与3	15.82	<0.01

F=31.43　P<0.01 　　表2所示，p21蛋白表达PU值在恶性肿瘤中最高，良性肿瘤次之，正常腺体最低，经方差分析及q检验，三组之间具有高度显著性差异（P<0.01)，按PU值等级分析，恶性肿瘤阳性以上占90％，弱阳性以下占10％，良性肿瘤阳性以上占75％，弱阳性以下占25％，正常腺体阳性以上占20％，弱阳性以下占80％。镜下所见，p21蛋白主要在胞浆内表达，亦可见胞核表达。其表达部位主要在腺管样区腺泡，其次为肌上使团块区，鳞状化生区及粘液软骨样区的阳性表达。部分恶性肿瘤浸润至瘤旁腺泡p21蛋白分别为强阳性和弱阳性表达。良恶性肿瘤区域内淋巴结呈阴性表达。 　　涎腺肿瘤发生，部位，包膜不同情况p21表达（表3）。 表3　涎腺肿瘤发生部位包膜情况p21表达比较（PU值）

责任编辑：姚红祥