〔摘要〕　目的：动态研究金黄地鼠舌癌微血管的空间构筑特点。方法：采用树脂血管腐蚀铸形扫描电镜观察的方法。结果：舌癌血管生成始于上皮单纯增生期。早期增生上皮的血供存在两种形式，原有组织微血管扩张、增粗，以及新血管形成。随着肿瘤细胞增殖、浸润，血管增生加剧，原有组织内毛细血管网、微动静脉及小动静脉发生变化与改建，失去原有组织内的微血管构筑特征，形成肿瘤独特的微血管系统。血管畸形明显，出现多数无功能血管，空间构筑混乱。结论：舌癌微血管构筑和正常组织相比有本质差异。
关键词　金黄地鼠；舌癌；微血管构筑；扫描电子显微镜检查

　　以往对血管生成的研究常采用光镜、电镜、免疫组化染色等方法，但由于其只反应肿瘤血管的二维平面，因而存在一定的局限性。有文献报道采用血管腐蚀铸型的方法，对颊囊癌、结肠癌、胃癌血管的空间排列进行了研究，但由于舌部解剖的特殊性，未见有自然状态下舌癌发生过程中肿瘤内独特的微血管形态和空间排列特点的报道，更缺乏肿瘤发展过程中微血管空间配布特点的动态研究资料。本实验采用化学致癌剂诱发金黄地鼠舌粘膜鳞癌，采用树脂血管腐蚀铸型扫描电镜观察的方法，从形态学角度模拟自然癌变过程，动态研究肿瘤微血管的空间构筑特点，为舌癌的顺铂白蛋白微球舌动脉灌注治疗(舌癌)提供肿瘤血管的形态学及空间构筑依据。

1　材料与方法
1.1　实验动物及分组
　　6～8周龄叙利亚金黄地鼠48只，随机分为6组，每组8只。1组，空白对照组，第21周末处死。2组，用5 g/L DMBA丙酮溶液涂布右舌侧缘中后1/3交界处+局部拔髓针刺激，于第9周末处死。3、4、5、6组处理因素同2组，分别于第12、15、18、21周末处死。
1.2　血管铸型的制备
1.2.1　预聚液准备
　　按下列比例量取试剂于锥形瓶中：
　　(1)甲基丙烯酸甲酯(Methyl methacrylate)90%；
　　(2)丙烯酸甲酯(Methyl acrylate)10%；
　　(3)过氧化苯甲酰(Benzoyl peroxide),占总液量的6%。
　　混匀后，水浴加热至80～86 ℃，见溶液逐渐变稠，至粘稠度约呈30%～50%水甘油浓度时停止加热，迅速流水冷却，加入苏丹Ⅲ，混匀后置冰箱内备用。商品用甲基丙烯酸甲酯及丙烯酸甲酯含有阻聚剂对苯二酚，应用前必须用20 g/L NaOH溶液洗涤去除，再用蒸馏水洗至呈中性，用无水亚硫酸钠去水。
1.2.2　灌注方法
　　金黄地鼠血管系统冲洗同金黄地鼠舌癌血管生成的组织定量研究〔1〕。灌注前以体积分数为0.5%戊二醛10 ml灌注固定，然后注入少量单体以防止预聚液接触水后表面硬化，阻塞血管。预聚液内加入液体量1%的促进剂二甲基苯胺(dimethylaniline)，混匀后以16～18 kPa的压力于5 min内灌入。至右心房流出预聚液为止，结扎上腔静脉及升主动脉。将注入树脂的地鼠置于60 ℃恒温水浴中浸泡0.5 h，促进树脂硬化。1.2.3　扫描电镜标本的制作及观察
　　取硬化后的肿瘤及周围组织各两块，置入400 g/L KOH水溶液中室温下腐蚀4 d左右，待腐蚀完毕，流水缓缓冲洗，去除腐败组织，于双目解剖显微镜下检查，至无残存组织为止。将标本干燥，真空离子镀膜后，于Amray-1000B型扫描电镜下观察，并摄像记录。

2　结　果
　　正常空白对照组及丙酮涂布+拔髓针局部刺激自身对照侧舌部血管网为一些直径约为15 μm微动脉组成的微血管网，微动脉分出直径约7 μm的毛细血管。这些毛细血管形成似“花蓝状”或“梅花瓣”样的血管袢。低倍镜下呈鱼网状，微动脉间相互吻合，深部肌层的血管为一些直径约6 μm的毛细血管，排列均匀，血管表面光滑，粗细一致，但稍迂曲，这可能和舌是一个运动器官，迂曲的血管和舌的运动功能相一致。(图1)。电镜下测量各级微血管的直径如下：毛细血管4～8 μm，微动脉：10～18 μm，微静脉15～22 μm，小动脉：20～25 μm，小静脉：23～30 μm。电镜下观察小动脉较光滑，有弹性，无内皮细胞印迹，而小静脉管壁不甚光滑，弹性较差，有内皮细胞印迹。

责任编辑：姚红祥