图4　两组颊癌患者的生存率曲线

表1　本组患者的主要临床病理资料与凋亡指数

	病例数	构成比(%)	AI范围	AI均值
TNM临床分期
Ⅰ～Ⅱ期	5	14.7	0.16～0.56	0.35
Ⅲ期	8	23.5	0.18～0.70	0.33
Ⅳ期	21	61.8	0.12～0.92	0.40
病理学分级*
Ⅰ级	18	52.9	0.12～0.40	0.25
Ⅱ级	12	35.3	0.28～0.68	0.45
Ⅲ级	4	11.8	0.52～0.92	0.73
颈淋巴结转移
阳性	12	35.3	0.15～0.70	0.39
阴性	22	64.7	0.12～0.92	0.37

*经秩和检验P<0.01 2.3　颊癌凋亡发生率与其预后(生存率)关系分析 　　根据各样本凋亡指数的大小将34例颊癌患者的随访资料分为两组，即高凋亡指数组(AI≥0.38)和低凋亡指数组(AI<0.38)。以Kaplan-Meier法计算生存率并作生存率曲线，如图4示，不同凋亡指数组间的生存率无明显差异。进一步对资料进行对数秩检验(表2)，P>0.05，说明颊癌细胞凋亡发生率高低与其预后无关。 表2　颊癌生存率比较对数秩检验总结表

3　讨　论
　　当细胞进入凋亡过程，早期便出现双链DNA于核小体连接处断裂，形成约180bp的DNA片段以及游离的O′端。在适宜的温度下利用末端脱氧核苷酸转移酶将连接有荧光素的dUTP结合到断裂DNA的3′端，再以抗荧光素抗体按免疫细胞化学方法加以显色，该法称为TUNEL法。不仅可于原位观察组织中凋亡细胞的发生位置和分布特点，而且具备早期准确显示凋亡细胞形态特征之优点。相比之下，HE染色往往缺乏直观性，计数时容易忽略早期形态不典型的凋亡细胞，计算的凋亡指数值偏低〔4〕。我们利用TUNEL法观察到颊癌凋亡细胞的形态学特征，特异性着色的颊癌凋亡细胞散在分布，胞核固缩、裂解，形成凋亡小体。因此，原位DNA缺口末端标记为细胞凋亡的组织学研究提供了较好的方法。
　　本研究通过计算凋亡指数反映颊癌组织中癌细胞凋亡发生率，结果发现颊癌凋亡指数高低与其病理学分级有关，与文献报道的结论相似〔1〕。颊癌恶性度越高其凋亡发生率相应增加，这一结果似乎与肿瘤的发展规律相矛盾，因为理论上认为，恶性程度高的肿瘤其凋亡发生率应该较低方能体现该肿瘤生长旺盛之特征。但近来的研究证实，某些重性肿瘤中，肿瘤细胞凋亡与增殖呈正相关关系，即凋亡指数高的肿瘤中其增殖指数也高，凋亡指数不仅反映了肿瘤细胞丧失情况，同时也反映其增殖情况〔5,6〕。因此，在恶性度较高的颊癌中细胞凋亡发生率较高，癌细胞增殖活性可能也相应地增强。细胞凋亡是多细胞生命体在生理或病理条件下自主发生的一种死亡形式，与细胞增殖一起构成平衡体系，当肿瘤生长至一定程度时，肿瘤细胞增殖和死亡维持相对平衡，增殖快、恶性度高的肿瘤细胞凋亡势必会增加〔7〕。在肿瘤发展过程中，凋亡与增殖均为异常遗传编程事件，发生与否取决于各自的相关促进因子的参与，特别是有关凋亡调控基因的研究成为关注的焦点。
　　TNM临床分期体现了肿瘤的不同发展阶段，而颈淋巴结转移是颊癌发展过程中的重要转归，直接关系到颊癌的预后。本文结果未能揭示细胞凋亡与临床分期以及颈淋巴结转移之间的相关关系，说明颊癌细胞凋亡发生可能更多地依赖于癌细胞自身的遗传性控制，与分化程度等内在因素关系更为密切，而与肿瘤的发展阶段无关。另外，细胞凋亡的发生是一个瞬时变化的过程，凋亡细胞最终以凋亡小体的形式被组织中的相邻巨噬细胞所清除，整个过程大约在几小时内便告完成，限于方法学上的静态特征只能检测某一时刻凋亡发生情况。因此，研究肿瘤发展动态进程中细胞凋亡规律有待进行检测方法的探索。

责任编辑：姚红祥