摘　要：目的：探讨直流电对人舌鳞状细胞癌Tca-83细胞系的抑杀作用。方法：对体外培养的人舌鳞状细胞癌细胞系Tca-83采用不同 的电处理 参数进行了直流处理。观察处理后癌细胞的形态、结构、生长情况、生物学特性；检测电处 理后培养液的酸碱度、电解质的改变情况。结果：直流电处理对舌 鳞状细胞癌有明显的杀伤及抑制作用。在电压一定的情况下增加电量可提高抑杀效率。电处 理后的培养液pH，电解质，有机成分发生较大改变，其对癌细胞的生长有一定的抑制作用。 电处理后未被杀死的癌细胞增殖能力也明显减低。结论：直流电处 理可通过电解、电泳、电渗作用直接杀伤舌癌细胞，亦可通过改变细胞生长的外环境抑制舌 癌细胞修复、生长、增殖。
关键词：直流电；舌；鳞状细胞癌；细胞系

　　我科于1995年始开展头颈恶性肿瘤的直流电治疗。在手术前辅助治疗及丧失手术时机的 患者的治疗方面进行了一些探索，取得了一定的治疗效果。但因患者的个体条件、肿瘤分型 、分期不同，给我们评价电化疗在抑杀舌鳞状细胞癌的作用上造成了困难。因而有必要在体 外条件下观察、评价直流电治疗对舌鳞状细胞癌的作用效果及处理后细胞形态及生物学行为 的改变，探索有效的治疗参数。

1　材料与方法

1.1　人舌鳞状细胞癌细胞系Tca-83(北京医科大学口腔医学院提供)：以RPMI 1640培养基 常 规培养于25 ml培养方瓶中，取对数生长期细胞，用含1.25 g/L胰蛋白酶，2 g/LEDTA的消化 液消化并收集细胞，制成5.0×103/ml的细胞悬液。分别以每孔2 ml的量接种于24孔细胞 培养板。37 ℃，体积分数(CO2)=5%培养箱(NAPO 5410)，培养72 h取出培养板进行实验。
　　将等量接种的孔板随机。分为空白对照组、实验组。实验组按电压(伏特V)，电量(库仑 C)及处理后是否更换培养液分为：5V/5C换液、5V/10C不换液、5V/5C不换液组。
　　实验在超净台内进行。将盖板取下，换上预先钻好小孔并消毒好的盖板，通过小孔插入正、 负各一个铂金电极，两电极以1.0 cm间距插入达孔底。按设计分组，接通SDZLY-3电治疗仪 (广西柳州地区无线电总厂)，通以平稳电流，逐孔电处理。空白对照组不行电处理。电处理 完毕，观察各组处理后情况并将空白组及电后需换液组孔内培养基小心吸出，加入2 ml新鲜 培养基。不换液组仍保留电处理后的培养液。各板置37 ℃，体积分数(CO2)=5%培养箱继 续培养。每隔24 h各组取2孔进行检测。
1.2　检测方法
1.2.1　细胞形态改变　(1)各组分别于处理后0～6 d，分别在倒置生物显微镜下观察细胞生 长情况。(2)取生长于玻片上的细胞在5V/10C电处理后继续培养2 d，常规制作扫描电镜标本 ，JSM-T33扫描电镜观察。
1.2.2　生长曲线的测定　每组于处理后1～6 d，分别取2孔，经消化后，加入250 μl 培养基制成细胞悬液。血球计数板计算活细胞数。
1.2.3　取100 μl上述细胞悬液加至96孔培养板，每孔加入5 g/L噻唑蓝(MTT，SIGMA)20 μ l，37 ℃培养4 h后，吸去上清液，每孔加入二甲基亚砜100 μl，充分混匀后在(Bio-tek EL3IIS)全自动酶标仪上测570 nm吸光度值。据公式算出各处理组每天杀伤率。
　　杀伤率=(对照组吸光度值—实验组吸光度值)/对照组吸光度值。
1.2.4　培养液电解质、pH值测定　分别采集空白组，5V/5C、5V/10C组阴、阳极区；5V/10C 阴、阳极混合液，深圳IMS-952型电解质分析仪测定pH值及K、Na、Cl、Ca离子含量。

2　结　果

2.1　电处理时培养液变化
　　电处理时培养板各孔中阳极产生大量泡沫，阴极泡沫较少；阳极区培养液呈黄色，p H3左右，阴极区培养液呈紫红色，pH12左右。两极间酸碱度差别有一明显分界区。电处理过程中该界限逐渐清晰，终止处理后两极间液体渐相互渗透、弥散。
2.2　倒置显微镜下观察
　　空白组癌细胞呈多角形，均匀分布于孔底，细胞边界清 晰。各处理组低倍镜下见：阳极区细胞碎裂、固缩，细胞形态、结构消失，细胞碎片多。阴 极区细胞水肿，呈类圆形。低倍镜下细胞边界尚清楚，高倍镜下见广泛细胞膜连续性中断。 处理后即可观察到此表现，24 h后该现象明显。此后阳极区仍无活细胞，阴极区及阴、阳极 交界 区细胞可少量存活，自行修复并恢复分裂能力。镜下见癌细胞的破坏、形态改变、存活及修 复能力与各组的处理条件有关。5V/10C不换液组与5V/5C不换液组比，癌细胞破坏程度大， 形态改变明显，修复能力差。5V/5C不换液组与换液组比，各天生长情况均较后者差。

责任编辑：姚红祥