摘　要：目的：应用化学交联法研制磁导向甲氨蝶呤缓释药物。方法：采用碳二亚胺、活化酯及SPDP法将甲氨蝶呤(MTX)与中间载体人血清白蛋白(HSA)交联，并活化MTX非药理活性基团，与生物磁液结合，制成胶态偶联物—甲氨蝶呤磁性抗癌药FM-MTX。应用光谱及色谱法检测其药物含量。结果：化学交联法制备出磁导向甲氨蝶呤白蛋白缓释药物，其性质及药物含量稳定。结论：以化学交联法研制磁导向甲氨蝶呤缓释药物方法可行，药物含量以高效液相色谱法检测最准确。
关键词：甲氨蝶呤；磁微球；靶向给药系统；高效液相色谱法

　　恶性肿瘤已成为当今世界最主要的死亡原因之一。化学药物治疗，经历了半个多世纪的不断发展和完善，已成为恶性肿瘤综合治疗的主要手段之一。但几乎所有的抗癌药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也杀伤正常组织细胞。临床应用时常引起严重的毒副反应。寻求既能保护正常组织器官，又具有最大可能杀伤肿瘤细胞的治疗途径和方法，是广大医药工作者研究的热门课题。
　　抗癌药物磁性微球载体系统是七十年代末期开始研究的一种新型剂型〔1〕。它是将药物与具有磁响应物质结合构成完整的药理体系〔2，3〕。将磁性药物注入体内，同时在肿瘤外部施加一定场强的外磁场，利用磁性药物的流动性能和磁场诱导性能，将磁性药物载体固定于肿瘤靶区内。在靶区药物以受控的方式从载体中释放。由于它能提高靶区的药物浓度，并能延长药物在靶区的作用时间，使药物在靶组织的细胞或亚细胞水平发挥药效作用，而对正常组织细胞无太大影响〔4，5〕。
　　本研究选用抗瘤谱较广、生化药理机制最为清楚的抗癌药甲氨蝶呤，根据甲氨蝶呤分子结构的特点，采用碳二亚胺法、活化酯法及SPDP异型双功能试剂法将甲氨蝶呤(MTX)与中间载体人血清白蛋白交联，并活化MTX非药理活性基团，与含有超微磁粒的生物磁液结合，制备出胶态偶联物甲氨蝶呤磁性白蛋白微球载体系统(FM-MTX)。并分别利用高效液相色谱法及紫外光谱法检测其理化性能及药物含量。

1　材料与方法

1.1　主要实验试剂
　　甲氨蝶呤原料药由上海第十二制药厂提供，纯度为99.7%；人血清白蛋白(上海生物制品研究所)；N-羟基琥珀酰亚胺(Fluka chemie AG)；3-(2-吡啶二巯基)丙酸-N-琥珀酰亚胺酯(SPDP)(第四军医大学毒理教研室)；碘化-1-环己基-3-(3-三甲氨丙基)碳二亚胺(上海东风试剂厂)；2，2’—二环己基碳二亚胺(DCC)(军事医学科学院)；氨水、氯化胺(西安试剂厂)；十二烷基油酸钠(西安试剂厂)；FeCl2 、FeCl3(成都试剂厂)
1.2　生物磁液的制备
　　将氯化亚铁及氯化铁按1∶2比例分别制成溶液后混匀，加氨水、氢氧化钠、碳酸钠、进行沉淀反应。调节液体的pH值为10，使铁离子完全沉淀为止。制得黑色四氧化三铁胶体溶液放置澄清后，用虹吸方法进行沉淀分离。用蒸馏水洗涤沉淀物数遍，洗至无酸根离子。向沉淀物中加入表面活性剂十二烷基油酸钠，在86～90 ℃恒温条件下进行半小时吸附反应，使硫酸离子吸附在沉淀物四氧化三铁表面，冷却后加入稀盐酸，调溶液pH值等于5，让被油酸阴离子包裹的胶体粒子絮凝下来。絮凝物用蒸馏水洗至无氯离子，其沉淀部分放在抽气漏斗中过滤，即得到含水分的覆盖油酸的四氧化三铁滤饼。取出滤饼，放真空干燥箱内80 ℃烘干，即制得四氧化三铁超精细微粒。将磁粒与基液按一定体积重量比，充分混合研磨，促进四氧化三铁胶体微粉充分分散在基液中，即得到界面稳定的生物磁液。
1.3　MTX活化酯的制备
　　MTX原料药1 000 mg、DCC 480 mg溶于40 ml二甲基甲酰胺溶液中，4 ℃反应18 h后，于反应混合物中加入NHS 280 mg、吡啶320 μl，继续在4 ℃反应6h，反应混合物离心(10 000 r/min，20 min)，收集上清，-30 ℃冷冻干燥保存。
1.4　磁性甲氨蝶呤缓释剂的制备
　　人血清白蛋白HSA首先通过Sephadex G-150以去除HSA双体，40 ml HSA(10 g/L)室温下与5倍过量SPDP(溶于二甲基甲酰胺中)反应，1 h后过Sephadex G-25柱，去除未反应的试剂，得到暴露巯基的人血清白蛋白HSA-SH。加入MTX活化酯二甲基甲酰胺溶液，以0.2 mol/L氢氧化钠调pH至8.0，4 ℃反应18 h，反应混合物过Sephadex G-25柱，去除游离甲氨蝶呤。在生物磁液中加入EDCI 40 g/L，搅拌加入HS-HSA-MTX交联物，超声振动5 min，置4 ℃搅拌3 h，磁场吸附3 h，透析72 h，过Sephadex 4B柱，浓缩分装后冷冻干燥保存或封装保存。

责任编辑：姚红祥