1.5　磁性甲氨蝶呤缓释药物含量检测
1.5.1　紫外分光光度法MTX含量检测〔6〕
　　精密称取标准品MTX 5 mg两份，分别置于100 ml容量瓶中，用1.5 ml 2 g/L Na2CO3溶解，然后用0.1 mol/L HCl稀释至刻度。此溶液仍用0.1 mol/L HCl分别稀释成含12.5，6.25，3.125，1.562 5，0.781 25 mg/L，在306 nm处测定其吸光度。将测得的数据按回归法处理得标准曲线方程，并绘出吸光度-浓度曲线。
　　精密吸取FM-MTX 1 ml 3份，按等比浓度稀释1∶10，1∶100，1∶1 000，分别测定306 nm处吸光度，在吸光度-浓度标准曲线上推算其含量浓度。
1.5.2　高效液相色谱法MTX含量检测〔7〕
　　精密称取MTX标准品1 mg，放置于20 ml容量瓶中，终浓度为50 mg/L。再依次稀释成5、4、3、2、1 mg/L。各吸取0.1 ml上样，在高效液相色谱仪(HPLC)上检测306 nm处的MTX峰值及峰面积(色谱柱150 mm×4 mm，填料YWG-C18，直径10 μm；流动相：甲醇-pH6.0磷酸缓冲液40份∶60份，流速1.0 ml/min)。以峰高为纵坐标，MTX浓度为横坐标，拟合标准曲线方程。
　　精密吸取FM-MTX 0.1 ml，分别稀释成10、100、1 000 ml。各取0.1 ml上样，在HPLC上检测MTX特征峰，以峰高及面积在标准曲线上求得MTX药物浓度。
1.5.3　原子吸收光谱法Fe3O4含量检测
　　精密吸取FM-MTX 0.1 ml3 份，加10 ml HNO3-HCIO4(4∶1)消化液，盖上表面皿，置电垫板上低温消化至液体透明，大火蒸干，无碳化时取下，加体积分数为0.2%的HNO3溶解残渣 ，用去离子水定容至10 ml，在原子吸收光谱仪上进行Fe原子测定。灯电流15 mA，波长为248.3 nm，空气压力156.89 kPa，乙炔气压力25.49kPa，按三份样品计算均值标准差，按Fe分子量55.847，O分子量15.999 4，计算Fe3O4含量=1.382×Fe含量。

2　结　果

2.1　生物磁液及FM-MTX特性
　　Fe3+及Fe2+高度弥散于水基液态载液中，构成一种高稳定性的胶体溶液。微粒与载液通过界面活性剂十二烷基油酸钠制成的这种微乳磁液，即使在重力场、电场、磁场作用下也能长期稳定存在，不产生沉淀和分离。制得的磁液经高速离心和梯度磁场处理，测得其磁化曲线呈光滑对称的“S”形，无矫顽力及剩磁，呈超顺磁性。稀释12～20倍后仍呈同样曲线，仅其磁化强度缩小12～20倍。
　　甲氨蝶呤经过活化酯反应，在SPDP双功能试剂的作用下与暴露巯基-SH的HSA氨基反应，制得SH-HSA-MTX交联物，在EDCI和4-DMAP的作用下与生物磁液反应，制备出稳定的FM-MTX结合物。冷冻干燥后直接封装安瓿保存，无结构特性改变。
2.2　MTX含量测定结果
2.2.1　紫外光谱检测
　　在盐酸溶液稀释下，紫外光谱扫描显示，在306 nm波长处有最大吸收峰，MTX的特性吸收曲线不变。(图1)

图1　MTX紫外光谱306 nm吸收图谱

　　按MTX标准品12.5、6.25、3.125、1.5625、及0.781 25 mg/L在306 nm处测得的光吸收度，绘制标准曲线(图2)。r=0.997，在0.8～12 mg/L区间光吸收度与MTX浓度呈直线关系。FM-MTX用HCl等比浓度1∶100稀释后，测定306 nm处吸光度0.12。从标准曲线上推算出FM-MTX中MTX的含量为250 mg/L。

图2　MTX紫外光谱306 nm吸收标准曲线

2.2.2　高效液相色谱测定结果
　　MTX分子量恒定，其极性结构在甲醇洗脱液中为恒定峰。MTX标准品在反相高效液相色谱仪上呈现恒定单峰型，样品出峰时间一致，为8.9 min。现配的MTX标准品1、2、3、4、5 mg/L在HPLC上显示的峰高及峰型如图3所示。

图3　MTX标准品峰型

　　以MTX为横座标，峰高为纵座标，绘制MTX标准曲线(图4)。其标准曲线方程为：Y=9.34X+3.30(r=0.99986，AUFs=0.01)。

图4　MTX HPLC标准曲线

　　FM-MTX样品HPLC峰型及出峰时间与MTX标准品一致。稀释100倍的样品，以离心后过滤膜，在HPLC测得的峰高在HPLC MTX标准曲线上求得MTX含量为260 mg/L；从而证实FM-MTX样品原药中MTX含量为260 mg/L。

责任编辑：姚红祥