2.3　FM-MTX中Fe3O4含量测定结果
　　取FM-MTX样品3份，每份在原子吸收光谱仪上测定3次，Fe元素含量为(47.97±0.52) mg/L，即F33O4平均含量为66.29 mg/L。

3　讨　论

　　抗癌药物磁性微球载体是将药物与具有磁响应的物质结合构成的一种新剂型。为使磁性药物微球具有足够的磁响应力，强磁材料中以Fe3O4铁氧体为最佳〔1〕。采用10 nm以下Fe3O4微粒能稳定地分散在水和油中，形成磁性胶体溶液，在重力场作用下也不会发生凝聚和沉淀。作为药物载体，以Fe3O4为基核的强磁材料优于纯铁粉、羰基铁、钴铁合金、钡锶铁氧体及钕铁硼等稀土材料。在表面活性剂存在下，Fe3O4无机物表面有机化，制备成亲水或疏水极性的生物磁液。这是可以制备磁性药物载体的分子基础。
　　制备缓释药物，Widder等〔1〕采用热固化法制成阿霉素磁性白蛋白微球，将Fe3O4药物水溶液加入棉籽油中，加热至105～120 ℃，热固定10 min，使药物固定于白蛋白基质中。由于热固定方法温度太高，药物容易分解破坏。后又采用戊二醛或甲醛硬化微球，避免了阿霉素药理活性丧失。制得的药物微球直径1～3 μm，可供动脉和静脉注射应用。
　　王平康等〔2〕采用氧化铁，加入IV族元素，在700 ℃高温烧结后粉碎净化，与阿拉伯胶、水解明胶及药物混合，加入液体石蜡及Span等活性剂，加温至30～60 ℃进行搅拌，冷却后得到直径为8 μm以下的磁性药物载体。由于明胶微球稳定性欠佳，达不到药用标准。
　　有关甲氨蝶呤与白蛋白连接的方法很多。Leuy等〔3〕报道采用重氮反应法，使甲氨蝶呤的胺基与亚硝酸反应得到重氮盐。然后直接交联在蛋白质中酪氨酸残基酚羟基的邻位，成为一个偶氮化合物。采用此方法，易形成大量沉淀，难于得到具有活性的结合物。Ibrahim等〔9〕采用碳二亚胺法替代重氮化反应，水溶性碳二亚胺可激活羧基，形成中间产物酰异脲及酐，再与蛋白质胺基反应形成酰胺链。但是，由于甲氨蝶呤及蛋白质中存在羧基和胺基，会形成分子内和分子间交联，影响生物活性。Devineni等〔10〕报道采用活性酯法，首先使用N-羟基琥珀酰亚胺和2，2’-二环已基碳二亚胺处理甲氨蝶呤得到甲氨蝶呤活性酯，然后与白蛋白交联。这样，不仅性质稳定，连接数目较多的药物分子，而且能保持较好的水溶性。
　　我们采用生物磁液，选用十二烷基油酸钠作为表面活性剂，它有非极性的疏水碳氢链部分和极性的亲水基团共同构成，且两部分分别处于两端，形成不对称结构，其疏水基团与Fe3O4粒子结合，在粒子表面减少其张力。亲水基团为离子型活性剂，可使磁微粒能稳定地悬浮于载液中，并能与可溶性药物基团结合。在SPDP及DCC等交联作用下，与白蛋白、甲氨蝶呤化学偶联，避免加温过高造成的药物作用下降，且使药物微球粒径在1 μm以下，符合体内药物静脉及动脉注射应用的要求〔8〕。
　　FM-MTX制成后，首先要对其各组成成份进行检测， 包括MTX含量、白蛋白含量、Fe3O4含量；并对其理化性能及稳定性进行测定。这是甲氨蝶呤磁性药物制剂质量控制的重要特性参数。
　　甲氨蝶呤紫外光谱扫描显示，其盐酸溶液在244 nm、306 nm波长处有最大吸收，在234 nm、262 nm波长处有最小吸收(图1)。中国药典(1985)规定，采用PC层析后，再用紫外分光光度法测定。但该方法既费时间，误差又大。为提高检测方法的灵敏度和准确性，中国药典(1990)将本品测定方法改为HPLC法〔7〕，其灵敏度为2 ng，标准差为0.39 ng。
　　我们利用MTX的上述特性，分别进行了紫外分光光度计法测定，反相高效液相色谱法测定结果以HPLC法较佳。测得FM-MTX中MTX含量为260 mg/L。Fe3O4含量采用浓硝酸水解后，其水溶液应用原子吸收光谱法测定铁离子的含量，再推算出Fe3O4的含量，并按分子量推算其克分子摩尔比。■

基金项目：国家自然科学基金资助项目　39070871

责任编辑：姚红祥